【摘 要】
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目的 克隆人WWOX基因,构建WWOX基因的真核表达载体,并观察其在人胆囊癌细胞株GBC-SD中的表达.方法 提取GBC-SD细胞中总RNA,采用RT-PCR扩增WWOX基因,将该基因连接至真核表达载体pcDNA3.0中,构建真核表达载pcDNA3.0-WWOX,用限制性内切酶ECO Ⅰ和Xho Ⅰ做双酶切分析,DNA序列分析鉴定重组质粒,将测序正确的重组质粒转染人胆囊癌细胞GBC-SD并用RT-
【出 处】
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中华医学会2012年第十三届中华肝胆胰脾外科专业学术论坛
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目的 克隆人WWOX基因,构建WWOX基因的真核表达载体,并观察其在人胆囊癌细胞株GBC-SD中的表达.方法 提取GBC-SD细胞中总RNA,采用RT-PCR扩增WWOX基因,将该基因连接至真核表达载体pcDNA3.0中,构建真核表达载pcDNA3.0-WWOX,用限制性内切酶ECO Ⅰ和Xho Ⅰ做双酶切分析,DNA序列分析鉴定重组质粒,将测序正确的重组质粒转染人胆囊癌细胞GBC-SD并用RT-PCR检测WWOX基因的表达.结果 成功地建立了pcDNA3.0-WWOX重组质粒,DNA序列分析结果与Gene Bank中WWOX序列大小一致,RT-PCR结果示转染重组质粒组RNA水平明显高于对照组.结论 成功构建人WWOX基因重组质粒,并将重组质粒转染至GBC-SD细胞中,为胆囊癌的发病机制及治疗提供了分子生物学的依据.
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