【摘 要】
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为研究构建可转化纤维类固体废弃物生产乙醇的工程菌，采用RT-PCR方法克隆到绿色木霉(Trichoderma viride)AS3.3711的3种内切葡聚糖酶(EGⅠ、EGⅢ、EGV)、2种纤维二糖水解酶(CB
【机 构】
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哈尔滨工业大学生命科学与工程系,哈尔滨150001哈尔滨工业大学生命科学与工程系,哈尔滨150001
【出 处】
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第二届中国资源生物技术与糖工程学术研讨会
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为研究构建可转化纤维类固体废弃物生产乙醇的工程菌，采用RT-PCR方法克隆到绿色木霉(Trichoderma viride)AS3.3711的3种内切葡聚糖酶(EGⅠ、EGⅢ、EGV)、2种纤维二糖水解酶(CBHI、CBHⅡ)和2种β-葡萄糖苷酶(BGLI、BGILⅡ)的cDNA基因，测序后分别构建到酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)诱导型表达载体pYES2上。转化获得的外源纤维素酶基因转化子用2％的β-D-半乳糖诱导，用Northern杂交、EMC糖化力法分别对纤维素酶基因的转录和表达进行检测。结果表明：各转化子均能在酿酒酵母中表达有生物活性的纤维素酶且分泌到胞外。EGⅠ的cDNA开放阅读框长度为1377bp，编码459个氨基酸，推测的蛋白质分子量为48.1kDa，最适酶解温度为50℃，最适pH值为5.4；EGⅢ的cDNA基因开放阅读框长度为1254bp，编码418个氨基酸，推测蛋白质分子量为44.1kDa，最适酶解温度为60℃，最适pH值为5.8；EGV的cDNA开放阅读框长度为741bp，编码247个氨基酸，推测的蛋白质分子量为24.99kDa，最适酶解温度为60℃，最适pH值为5.4；CBH I的cDNA开放阅读框长度为1542bp，编码514个氨基酸，推测的蛋白质分子量为53.96kDa，最适酶解温度为60℃，最适pH值为5.8；CBHⅡ的cDNA开放阅读框长度为1413bp，编码471个氨基酸，推测的蛋白质分子量为49.55kDa，最适酶解温度为60℃，最适pH值为5.0；BGLⅠ的eDNA开放阅读框长度为2241bp，编码747个氨基酸，推测的蛋白质分子量为78.99kDa，最适酶解温度为60℃，最适pH值为5.0；BGLⅡ的cDNA开放阅读框长度为1350bp，编码450个氨基酸，推测的蛋白质分子量为49.95kDa，最适酶解温度为60℃，最适pH值为4.6。
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