【摘 要】
:
目的:应用表达载体pHIE3N表面呈现表达幽门螺杆菌Ure B串联融合表位。方法:通过改造表达呈现表达载体pHIE11,在质粒上的FhuA基因多克隆位点插入两个SfiⅠ酶切位点并调整读码框,改建成pHIE3N载体。将幽门螺杆菌三个ure B表位基因串联起来,双拷贝合成,然后利用pHIE3N表达幽门螺杆菌Ure B串联融合表位,用SDS-PAGE、Western blot和全菌ELISA检测所得到的
【机 构】
:
军事医学科学院生物工程研究所病原微生物与生物安全国家重点实验室,北京 100071 浙江工业大学药
【出 处】
:
第五次全国免疫诊断暨疫苗学术研讨会
论文部分内容阅读
目的:应用表达载体pHIE3N表面呈现表达幽门螺杆菌Ure B串联融合表位。方法:通过改造表达呈现表达载体pHIE11,在质粒上的FhuA基因多克隆位点插入两个SfiⅠ酶切位点并调整读码框,改建成pHIE3N载体。将幽门螺杆菌三个ure B表位基因串联起来,双拷贝合成,然后利用pHIE3N表达幽门螺杆菌Ure B串联融合表位,用SDS-PAGE、Western blot和全菌ELISA检测所得到的重组菌。结果pHIE3N质粒插入序列正确,能够特异性呈现表达UreB串联融合表位,表达产物的分子量约为60kD,与预期大小一致。全菌ELISA结果表明Ure B串联融合表位表达于菌体表面。结论 pHIE3N载体能够表面呈现Ure B串联融合表位,使Ure B串联表位得到呈现表达,为幽门螺杆菌疫苗的研发奠定了基础。
其他文献
目的:评价国内建立起来的in-house HIV-1基因型耐药检测方法的敏感性与准确性。方法:以美国FDA批准的HIV-1基因犁耐药性检测系统(ViroSeqTMv2.0,瑞士)为参比对象,与建立起的基因型耐药性检测方法(in-house)平行检测待检样本,比较二者在扩增效率、耐药突变位点检测以及耐药报告等方面的一致性。结果:已知的14850个耐药突变位点中,2种方法可同时对99.34%(1475
在我国广西地区收集1例感染了HIV-1毒株的病人外周血血浆,提取病毒RNA,利用逆转录巢式-PCR技术,分两段扩增病毒近似全长基因序列,对PCR产物进行核苷酸序列测定和分析,获得了8800bp长度的近似全长序列,利用MEGA软件进行系统进化分析,结果显示该毒株为G亚型毒株,系统发育分析结果显示该毒株与G亚型参考株成簇,Bootstrap值较高(99%);通过与世界上其他地区流行的G亚型毒株进行亲缘
目的:研究HBsAg和抗-HBs双阳性无症状乙肝携带者(“双阳性”)HBV s基因“a”决定簇基因变异情况。方法:利用乙肝酶免试剂初筛后用Abbott试剂确认出“双阳性”血清20份,荧光PCR试剂检测HBV DNA,采用PCR方法扩增S区或“a”决定簇基因序列,将PCR产物克隆入T载体,选择4-10个阳性克隆测序,分析“a”决定簇基因变异情况,同时利用INNO-LiPA HBV genotypin
以禽流感病毒RNA为模板,通过RT-PCR方法扩增得到NP全长基因,克隆到真核表达载体pFastBacHTa上,并在昆虫细胞中表达。表达产物经Ni柱纯化和western-blot鉴定后,点到醛基包被的载玻片上,制备检测流感抗体的蛋白芯片。利用该芯片分别对1-15亚型流感病毒免疫血清、SPF鸡血清、新城疫血清、法氏囊血清和现地血清样品进行检测,并与血凝抑制试验实验比较,符合率为100%。利用该方法对
目的:制备乙型脑炎病毒SA14-14-2(简称SA)和P3株的单克隆抗体,用于乙脑单克隆抗体捕获法检测血清乙脑病毒抗体,竞争抑制法及双抗体夹心法检测乙脑病毒的抗原含量。方法:分别用SA株减毒活疫苗和P3抗原免疫BALB/c小鼠,交叉加强1次,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0分别进行3次融合,培养上清经过分别包被人白蛋白(HSA)、P3、SA抗原的间接ELISA检测,选择HA抗体阴性、乙脑抗体阳
目的:本文对2010年广西HFMD死亡病例的影响死亡因素深入分析,探寻可干预的关键环节,为有的放矢地采取针对性措施提供科学依据。方法:从突发公共卫生事件报告管理系统的市级和县级疾病预防控制中心该病的死亡病例调查报告或防控工作进程日报中收集死亡病例的个案调查资料,将全面调查了感染病原、发病、就医和处理等情况的病例作为研究对象。采用PEMS 3.1版统计软件包进行统计分析,并严格按照标准执行。结果:共
目的:分析嗜人性猪内源性反转录病毒(Porcineendogenous retroviruses,PERV)感染的人源细胞中Stathmin蛋白的差异表达情况,探索嗜人性PERV感染人源细胞后可能产生的分子效应。方法:嗜人性PERV感染性克隆感染HEK293细胞,采用PCR、实时定量RT-PCR、免疫荧光分析确认PERV感染后,实时定量RT-PCR和免疫印迹法分析Stathmin蛋白表达差异。结果
在提出了预防和治疗幽门螺杆菌的疫苗——表位疫苗的的作用以及研究思路的基础上,本研究利用Hp感染患者外周血单个核细胞中的抗原特异性T细胞与步移重叠合成肤建立了一种系统筛选Hp保护性抗原免疫显性CD4+T细胞表位的方法。此方法为Hp表位疫苗的设计奠定基础。
目的:借鉴流行性脑膜炎球菌杀菌抗体测定法(TTC法),对传统的甲型副伤寒沙门氏菌血清杀菌抗体检测法进行改进。方法:在传统的TTC法基础上改用1%蛋白胨水和1%TSB琼脂分别作为稀释液和培养基,以甲型副伤寒沙门氏菌外膜蛋白免疫的家兔血清作为待测血清进行实验。另外增加补体与灭活补体组作为阴性对照。结果:以TTC作为指示剂的补体溶菌法检测甲型副伤寒沙门氏菌血清杀菌抗体活性是可行的,血清表现出有效的杀菌抗
目的:观察弓形虫可溶性速殖子抗原(STAg)免疫小鼠后,小鼠血清IgG抗体水平的动态变化,探索STAg抗原的最佳免疫次数。方法:5-6周龄BALB/c小鼠40只,随机分成对照组和实验组,其中对照组头背部皮下注射生理盐水,实验组头背部皮下注射20 μg STAg,免疫5次,每次免疫后一周处死一组小鼠,采血并分离血清,通过ELISA法测定IgG抗体亲和力;通过western-blot方法检测血清中产生