【摘 要】
：
为在真核表达系统中高效表达柔嫩艾美耳球虫钙依赖蛋白激酶3(Emeria tenella calcium-dependent protein kinase,EtCDPK3),获得有活性的天然蛋白,本研究利用毕赤酵母表达系统对该基因进行了表达.将EtCDPK3基因连接到毕赤酵母表达载体pPIC9k上,构建了重组质粒pPIC9k-EtCDPK3.重组质粒通过电激转化入酵母细胞GS115后,用组氨酸缺陷培
【机 构】
：
上海师范大学生命与环境科学学院,上海200234;中国农业科学院上海兽医研究所/农业部动物寄生虫学重点实验室,上海200241
【出 处】
：
上海市畜牧兽医学会2013年学术年会
论文部分内容阅读
为在真核表达系统中高效表达柔嫩艾美耳球虫钙依赖蛋白激酶3(Emeria tenella calcium-dependent protein kinase,EtCDPK3),获得有活性的天然蛋白,本研究利用毕赤酵母表达系统对该基因进行了表达.将EtCDPK3基因连接到毕赤酵母表达载体pPIC9k上,构建了重组质粒pPIC9k-EtCDPK3.重组质粒通过电激转化入酵母细胞GS115后,用组氨酸缺陷培养基和G418分别进行筛选,获得含重组质粒的酵母表达细胞.重组酵母细胞在含1％甲醇的BMMY培养基中诱导产生目的蛋白,培养收集1-4 d的部分上清.经SDS-PAGE检测,所表达的蛋白相对分子质量约为49 KDa.Western blot表明,该蛋白能与兔抗EtCDPK3血清特异性结合.结果表明,柔嫩艾美耳球虫CDPK3基因在毕赤酵母中成功的进行了表达,为进一步研究该蛋白的功能奠定了基础.
其他文献
为了解云南省荷斯坦奶牛和水牛奶新孢子虫感染情况,应用酶联免疫吸附试验(ELISA)对血清样品进行新孢子虫抗体检测,结果显示:68份荷斯坦样品中,抗体阳性7份,阳性率10.3％,2份可疑;106份奶水牛血清中,抗体阳性个数为0,2份可疑.检测结果表明:云南省荷斯坦奶牛存在犬新孢子虫感染,奶水牛可能存在着犬新孢子虫感染.
检视奶牛乳头可获取关于自己牛群的大量信息。文章就如何判定是挤奶系统，抑或环境因素所致的乳头状况异常进行探讨，提出乳头颜色改变、乳头基部肿胀、乳头末端发硬、乳头孔未关闭等都是短期影响所致的乳头状况异常，而乳头皮肤皲裂、出血为中期影响所致的乳头状况异常，过度角质化则属于长期影响所致的乳头状况异常。乳头状况评分是为了了解牛群的真实现状，除了可以帮助检查挤奶系统功能是否正常和评估挤奶操作流程是否到位外，还
本文拟以国际食品法典CODEX STAN 206标准为主以其他国际标准为辅，与我国相关标准作比较分析，进而从法规和标准的角度，探索中国本土奶牛养殖业的竞争力优势所在及其生存底线。
隐性乳房炎给奶牛生产造成严重的危害性,不仅使产奶量降低,还会影响到牛奶品质.因此,降低牛奶中的体细胞数对于奶牛生产具有重要的意义.据此,用新康美克进行奶牛体细胞数的治疗,结果发现隐性乳房炎牛只数减少了7头,隐性乳房炎发病率下降41.18％ (P＜0.01),隐乳乳区阳性数减少了12个,下降了40.84％;用药前后牛群混合乳样的体细胞细胞数由144万下降为83万,SCC下降了为61万,SCC下降数点
目的：脉搏波传导速度(pulse wave velocity,PWV)是判断与心脑血管疾病有密切关系的外周动脉壁硬化程度的指标.自发性高血压大鼠(SHR)是目前国际公认最接近于人类原发性高血压的动物模型,本实验将通过对不同年龄段的SHR的PWV值的测定,以及同期SHR颈动脉多普勒超声及病理结构分析,来揭示SHR不同生长阶段血管生理变化.方法：使用millar导管及血管病理分析对4周龄、6周龄、8周
凋亡是生物学过程中主要的组成部分之一,它在许多生物体的细胞增殖调控、组织器官重建等发挥着重要的功能。本研究中,我们使用凋亡常用的检测方法TUNEL (terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP nick-end labeling)和DAPI双染,定性分析日本血吸虫14天童虫虫体细胞凋亡,Annexin V-FITC/propidium i
血吸虫病在76个国家中可感染200百万人,仍是一个非常重要的公共卫生疾病.血吸虫在感染进程中与宿主发生相互作用机制十分复杂,miRNA可能在其中发挥重要的生物学功能.本研究利用miRNA芯片技术,检测日本血吸虫早期感染小鼠的miRNA表达谱变化.小鼠在日本血吸虫感染前及感染10天后,共检测到264个miRNA,其中在肝脏、脾脏和肺脏呈上调表达的分别有8、8和28个,呈下调表达的分别有3、5和23个
大鼠是日本血吸虫的非适宜宿主,与小鼠相比,大鼠的机体环境更不适宜日本血吸虫的生长和发育.miRNA作为内源性非编码RNA,在真核生物多个生物学过程中发挥重要的生物学功能.为研究miRNA在大鼠感染血吸虫中可能发挥的生物学功能,使用了包含大鼠成熟体miRNA的芯片,分析大鼠在日本血吸虫感染前和感染10后天肝脏、脾脏和肺脏miRNA的表达谱差异.本研究在大鼠肝脏、脾脏和肺脏中分别鉴定了16个、61个和
亲环素蛋白是一类具有肽基-脯氨酸顺/反异构酶活性的蛋白质.在原核和真核生物中,发现亲环素蛋白在细胞信号通路中发挥重要的生物学作用.本研究中,我们克隆了日本血吸虫亲环素A (CyPA)基因,构建了原核表达质粒,并分离纯化了可溶性表达蛋白.qPCR分析表明CyPA在日本血吸虫不同期别均有表达,其中在童虫7天和13天表达水平最高,且CyPA在东方田鼠来源童虫中的表达量显著低于小鼠来源的童虫.免疫组化分析
蜱是一种在医学意义上仅次于蚊子的外部寄生虫,侵害鸟类、爬行类和哺乳动物包括人类。唾液腺是蜱和宿主接触的第一个窗口,因此,唾液腺被认为是阻断蜱吸血和病原传播的直接切入点。为了探索唾液腺中的免疫原,本实验室将孤雌生殖长角血蜱的半饱血成蜱的唾液腺和黏合层进行双向电泳,并用蜱多次叮咬后所得的兔抗蜱抗体进行识别,识别的蛋白点用于质谱分析。结果表明,唾液腺中的不溶免疫原集中于20-45kDa,多个蛋白点是H1