【摘 要】
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目的：在大肠埃希菌中表达和纯化人分化抑制因子3(Id3),为进一步研究Id3的生物学功能打基础。 方法：PCR扩增人Id3基因编码区的DNA片段,将PCR产物克隆至pGEM-T Esay载体中并测
【机 构】
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南京军区南京总医院全军临床医学检验研究所,江苏,南京,210002
【出 处】
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2007年全国感染性疾病实验室诊断研讨会
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目的：在大肠埃希菌中表达和纯化人分化抑制因子3(Id3),为进一步研究Id3的生物学功能打基础。
方法：PCR扩增人Id3基因编码区的DNA片段,将PCR产物克隆至pGEM-T Esay载体中并测序鉴定。将Id3 cDNA片段重组入原核表达质粒pET-32a(+),转化入大肠杆菌BL21(DE3)中,用异丙基β-D硫代半乳糖苷(IPTG)诱导融合蛋白的表达,表达产物经Western blot进行鉴定,并进一步通过镍亲和层析柱纯化His-Tag标记的融合蛋白。
结果：成功地构建了Id3的原核表达载体。Western blot分析证实,在大肠杆菌BL21(DE3)中表达了His-Tag融合蛋白,并通过亲和层析法纯化到了相对分子量为33 kD的Id3融合蛋白。
结论：重组质粒pET32a(+)-Id3能在大肠杆菌BL21(DE3)中表达,纯化的融合蛋白可用于制备多克隆、单克隆抗体。
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