【摘 要】
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目的 抗抑郁药被WHO列为21世纪最需迫切开发的药物之一.为找到起效更快、毒性更小的药物,高通量、简便灵敏的筛选模型必不可少,本实验采用基于细胞株的荧光检测方法,建立
【机 构】
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中国医学科学院药物研究所,北京100050
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目的 抗抑郁药被WHO列为21世纪最需迫切开发的药物之一.为找到起效更快、毒性更小的药物,高通量、简便灵敏的筛选模型必不可少,本实验采用基于细胞株的荧光检测方法,建立了灵敏、可靠的5-HT转运体(SERT)抑制剂高通量筛选模型.方法 RBL-2H3细胞是一种可以分泌5-HT并且具有SERT的细胞株,很好的模拟了5-HT能神经元的生理状态；ASP与单胺类转运体结合进入细胞内,并发出黄色荧光；当存在其他可与转运体结合化合物,同ASP进行竞争时,进入细胞内的ASP数量减少,通过比较荧光强度的变化,筛选作用于5-HT转运体的重摄取抑制剂.取6×108 L-1细胞悬液加入96孔板,每孔0.1ml,待细胞贴壁生长良好时加入待筛样品10μl,在37℃孵育1.5 ～3 h后,避光每孔加ASP染料10μl(终浓度100μmol· L-),在37℃孵育1h,以D-Hanks液洗2次,在激发波长475 nm,发射波长605 nm处读数,进行结果统计.结果 通过建立的5-HT转运体抑制剂筛选模型,筛选了样品库编号为J21508-J21532；J25201-J35360共1万余样品,选择抑制率在40％～ 70％之间的样品356个进行复筛,每样品做3个重复,按照以上标准选择3个重复均符合阳性条件的样品结合MTT法,从中选择出具有一定的浓度剂量依赖性且毒性较小的化合物11个.结论 该方法简便快捷,结果灵敏并且模拟了生理状态下的神经突触前膜,实验采用荧光检测克服了以往采用放射性实验可能造成的环境影响,为大规模开展筛选实验提供很好参考.
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