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目的：
目前临床应用细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)治疗肿瘤主要通过静脉输注,CIK经血循环分布,到达肿瘤所在器官的数量较少,而CIK需接近肿瘤才能直接杀灭癌细胞.有报道将CIK输注在瘤周,其抑瘤疗效要优于静脉输注.但在瘤周注射存在穿刺损伤、癌细胞播散等问题.为了建立一种既可向大脑靶向移植CIK抑制脑肿瘤又不侵入脑实质的方法,笔者将一硅胶圈放在硬脑膜和软脑膜之间形成一人工囊腔,用弯针将硅胶圈内软脑膜多点刺破;经皮注射(或通过埋于皮下的注射接头、管道注射)将CIK注射到人工囊腔软脑膜表面,CIK可穿过软脑膜迁移入脑实质,以抑制脑内胶质瘤生长.还可将一3D细胞培养支架海绵铺在硅胶圈内(选用孔隙互通且不易被细胞堵塞的支架海绵).
方法:
CIK从人外周血单个核细胞(PBMC)诱导产生.用流式细胞仪检测CD3+/CD56+(CIK标志)细胞表达率.用四甲基偶氮唑盐(MTT)检测CIK杀CHG-5胶质瘤细胞的效率.取Balb/c裸小鼠(15周龄)用40 g/L水合氯醛(10 mL/kg)腹腔注射麻醉;在颅骨钻孔、切除硬脑膜,形成骨窗;通过骨窗将对数生长期的CHG-5细胞(每鼠1×104/5μL)注入脑皮质下约3 mm,作为肿瘤模型鼠.然后将一直径6mm硅胶圈从骨窗塞进硬脑膜与软脑膜之间并围绕瘤细胞接种点展开,圈的上下侧紧贴硬、软脑膜(与脑膜围成一人工囊腔).用弯针尖从骨窗探至软脑膜,在硅胶圈范围内多点刺破软脑膜;用骨蜡涂于骨窗洞壁(封闭残端及缝隙,但不封窗口);缝合头皮(经皮可触及骨窗口,以便向人工囊腔内软脑膜表面注射).接种后5d,将模型鼠随机分为4组:A组(n=9,软脑膜注射CIK),B组(n=8,软脑膜注射生理盐水),C组(n=9,尾静脉注射CIK),D组(n=9,尾静脉注射生理盐水).A组、B组经头皮刺入骨窗将CIK(1×106/10 μL)、生理盐水10 μL分别注入各鼠人工囊腔(CIK可穿过软脑膜或膜上破口进入脑实质);C组、D组将相同CIK悬液10μL、生理盐水10 μL分别注入各鼠尾静脉.而后每3d同法注射1次,共注射8次.末次注射后7d将各小鼠颈椎脱臼处死,剥离肿瘤,测瘤长径短径,计算肿瘤体积(V=ab2/2,a:肿瘤最大径,b:肿瘤最小径)和肿瘤生长抑制率[％=(对照组肿瘤体积-治疗组肿瘤体积)/对照组肿瘤体积×100％];以A、C组为实验组,B、D组为相应尾静脉对照组.
结果:
①诱导后CD3 +/CD56+细胞或CIK表达率为(50.2±17.3)％,较诱导前(2.5±1.32)％明显增加(P＜0.05).见表1.
②诱导后CIK体外杀瘤实验:CIK∶ CHG-5=10∶1、20∶1、40∶1时,杀瘤细胞率分别为(20.1±4.5)％、(29.6±6.8)％、(46.2±9.3)％(邻组间比较P均＜ 0.05).
③脑内肿瘤检测:治疗后,A组瘤平均体积(14.7 ±3.8)mm3明显小于C组瘤平均体积(22.3 ±5.4)mm3(P＜0.05).A组抑瘤率49.3％明显大于C组抑瘤率22.6％(P＜0.05).
结论:
多次将CIK经皮注射到软脑膜上人工囊腔内,可明显抑制裸鼠脑内胶质瘤生长,其抑制效果优于尾静脉注射CIK的效果.