苯代谢产物氢醌对hiPSCs的细胞毒性及胚层发育毒性研究

来源 :中国环境诱变剂学会风险评价专业委员会第二十届全国学术交流会议 | 被引量 : 0次 | 上传用户:ydahu
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  [目的]体外研究苯代谢产物氢醌对人源性多能干细胞hiPSCs 的细胞毒性以及对其随机向外、中、内三个胚层分化发育的影响.[方法]应用不同浓度的苯代谢产物——氢醌作为受试物,以0、1.25μM、2.5μM、5.0μM、10.0μM为暴露剂量,在体外首先进行24h 基础细胞毒性,选择细胞活性在90#以上的剂量作为最高染毒剂量;在选定的染毒剂量内,借助hiPSCs 在无血清、无动物源性蛋白的基础培养基中可以随机地向外胚层、中胚层和内胚层分化,来研究氢醌暴露对哪个胚层有毒性或毒性比较大.[结果]氢醌24h 染毒结束后,5.0μM 组活细胞数目下降,细胞活性在89.99±2.59#;10.0μM 组细胞镜下形态明显变小,活细胞数目明显下降,细胞活性在32.8±3.31#,有一定的剂量-反应关系,确定后续实验的染毒剂量为0、1.25μM、2.5μM、5.0μM.在随机分化的8 天中,外胚层基因MAP2、中胚层基因EOMES 和内胚层基因PAX6 在细胞内部的表达均逐渐增加,并在第8 天达到最高值;而氢醌暴露8 天后,这三个基因的表达均随暴露剂量的增加而降低,影响三个胚层的发育.[结论]氢醌暴露对hiPSCs 存在一定的细胞毒性,对随机分化过程有一定的胚胎发育毒性.
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