从猕猴肝脏组织扩增黄嘌呤脱氢酶/氧化酶(XDH/XO)基因片段

来源 :中国西部第十二届实验动物管理与学术研讨会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:wangke8611
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目的:RT-PCR扩增猕猴黄嘌呤脱氢酶/氧化酶(XDH/XO)基因片段,为进一步开展相关研究提供实验资料.方法:提取健康猕猴新鲜脏组织总RNA,用RT-PCR二步法进行XDH/XO基因片段扩增,对获得的目的片段核苷酸序列进行序列测定,测序结果经DNAMAN软件预测该段核苷酸的氨基酸序列,与genbank上发表的人类(Homo sapiens)、小鼠(Mus musculus)、家鼠(Rattus norvegicus)、野猪(Sus scrofa)等物种XDH/XO基因进行该序列同源性比对分析.结果:RT-PCR产物电泳检测得到了与设计大小相一致的目的条带,序列测定共测到683个核苷酸,DNAMAN软件预测该段核苷酸的氨基酸序列包括了1个编码158个氨基酸的开放阅读框(ORF),通过该软件包中Multiple alignment对目的基因片段的核苷酸序列与 NCBI报道的人类(U39487.1)、小鼠(NM0111723.2)、家鼠(NM017154.4)、野猪(JN896312.1)XDH/XO基因mRNA互补的cDNA核苷酸序列同源性进行同源性比较分析,结果显示所扩增得到的目的片段与人类同源性最高,为95.6%,与小鼠、家鼠、野猪的同源性分别为85.2%、84.3%、86.1%,说明获得的基因片段是猕猴的XDH/XO基因片段,且该基因在物种间具有较高的相似性.结论:在体外成功扩增出猕猴XDH/XO基因片段,为进一步开展高尿酸血症致病机理研究,抗高尿酸血症新药研发奠定工竹基础.
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