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以野外分离并经系统鉴定的H5NA、H9N2亚型禽流感病毒株为种毒,接种易感鸡胚,制备疫苗用抗原液,0.15﹪的福尔马林灭活后,以司本80及吐温80为乳化剂,10号白油为佐剂,制成H5N1-H9N2亚型禽流感二价油佐剂灭活疫苗.对H5N1-H9N2亚型禽流感二价油佐剂灭活疫苗多项技术指标进行了测定;证明本疫苗安全、无任何毒副作用;H9N2亚型高效价HI的抗体对H5N1亚型禽流感强毒没有丝毫保护力,二价疫苗中,H9N2和H5N1两种抗原没有相互干扰现象,就HI效价而言,H9N2抗原产生的HI高效价要高于H5N1抗原;效力检验采用肌肉注射的方法要比滴鼻、点眼和口服感染的途径确实;该产品免疫21、60日龄宫廷黄鸡,30、54、120、215日龄SPF鸡,免疫后10～16天产生免疫力,免疫后21天H5亚型的HI效价≥1:256;疫苗免疫接种一次,对H5N1亚型强毒的功毒保护范围为70﹪～100﹪,对H9N2亚型的保护率为100﹪.此外,通过试验也确定了HI效价与攻毒保护率、攻毒用病毒重分离的相关性,建立了禽流感二价疫苗的效力检验标准.