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目的：获得河南省耐多药结核分枝杆菌链霉素耐药相关基因rpsL和rrs突变特征，为开发和应用快速检测耐多药结核分枝杆菌链霉素耐药性的分子诊断工具提供更多的数据。方法： 收集115株耐多药结核分枝杆菌菌株，应用比例法药敏实验测定菌株对一线4种药物的耐药性。通过PCR和测序获得了链霉素耐药相关基因rpsL编码区全长和rrs高频突变区的突变特征。结果：发现了2个新突变位点rpsL2和rrs1443。rpsL121位密码子为多态性位点。63株MDR菌株发生rpsLA3突变，突变比例最高，为55.3％。rpsLA3主要突变类型为AAG→AGG。检测rpsL和rrs基因突变预测链霉素耐药性的灵敏度为88.9％，高于其他多数研究。有3株链霉素敏感的MDR菌株发生rpsL43突变，另有1株链霉素敏感的MDR菌株发生rrs513突变。结论：链霉素耐药株的rpsL和rrs基因的高突变频率提示在河南地区通过检测此两个基因突变来预测耐多药结核分枝杆菌链霉素耐药性有较好的应用前景。少数链霉素敏感株也发生突变，而11％的链霉素耐药菌株无突变，其原因需要进一步研究。