【摘 要】
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[目的]构建高表达N-乙酰氨基半乳糖转移酶3 (GalNAc-T3)人肺腺癌A549细胞株,观察高表达GalNAc-T3对肺腺癌细胞株A549迁移能力的影响.[方法]从正常人肺上皮细胞HFL1中提取野生型GalNAc-T3的cDNA,将其连入含有红色荧光蛋白和嘌呤霉素抗性基因的慢病毒表达载体(pLVX-DsRed-Monomer-N1)中,通过慢病毒感染将目的基因转染入A549中.通过观察细胞中红
【机 构】
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大连医科大学附属第一医院胸外科 大连医科大学附属第一医院胸外科;大连医科大学附属第一医院大连肺癌诊
【出 处】
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中国医师协会胸外科医师分会2015年会、第六届全国胸外科学术大会暨第八届浙江省胸部肿瘤论坛
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[目的]构建高表达N-乙酰氨基半乳糖转移酶3 (GalNAc-T3)人肺腺癌A549细胞株,观察高表达GalNAc-T3对肺腺癌细胞株A549迁移能力的影响.[方法]从正常人肺上皮细胞HFL1中提取野生型GalNAc-T3的cDNA,将其连入含有红色荧光蛋白和嘌呤霉素抗性基因的慢病毒表达载体(pLVX-DsRed-Monomer-N1)中,通过慢病毒感染将目的基因转染入A549中.通过观察细胞中红色荧光蛋白的表达情况,并利用嘌呤霉素进行筛选,得到稳定高表达GalNAc-T3的A549细胞株.根据处理方式不同将细胞分为3组：空白组(A549组),转染空载体组(NC组)和转染GalNAc-T3组(GT3组).通过观察载体所表达的红色荧光蛋白了解载体基因的表达状况,采用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time qPCR)和蛋白印迹法(Western Blot)分别检测各组细胞内GalNAc-T3在mRNA和蛋白水平上的表达情况,利用划痕实验检测各组细胞的迁移能力.[结果]荧光显微镜观察到NC组和GT3组能够稳定表达红色荧光；Real-time qPCR和Western Blot技术可检测到在GT3组中,GalNAc-T3在mRNA和蛋白水平上的表达量明显升高(分别为184.998±27.5062和2.446±0.0602),NC组较A549组差异无统计学意义；划痕实验中,GT3组细胞在12h与24h时划痕的愈合率较A549组明显降低(分别为0.3523±0.0304和0.5816±0.0064),并且NC组较A549组差异无统计学意义.[结论]成功构建了带有红色荧光蛋白的高表达GalNAc-T3人肺腺癌细胞株A549-GalNAc-T3-DsRed；高表达GalNAc-T3可以明显抑制肺腺癌细胞A549的迁移能力.
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