Babl/c小鼠乳糖酶活性测定条件的研究

来源 :中华医学会第十八次全国儿科学术会议 | 被引量 : 0次 | 上传用户:w7324535
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目的:乳糖酶是存在于小肠粘膜刷状缘上的双糖酶,在人体对乳糖的消化吸收过程中有其重要的作用.由于该酶的活性降低或缺失而导致的乳糖不耐受是儿科粘膜活检等,但在动物实验中多应用TGO显色剂法,但不同动物的测定调节有十分常见的临床疾病.目前为止人体内乳糖酶活性的测定方法有呼氢实验、小肠差异,因此本文旨在通过对babl/c小鼠肠粘膜乳糖酶活性测定研究,建立测定babl/c小鼠小肠乳糖酶活性的最佳条件,为对乳糖不耐受进行进一步研究提供一种方便、准确的检测方法,以为研究多代饮奶对balb/c小鼠乳糖活性的影响提供依据,同时检测babl/c小鼠肠道乳糖酶的分布.方法:1.取鼠肠粘膜匀浆上清液与乳糖底物溶液反应一段时间,将酶灭活后与显色剂反应,在稳定呈色后于420nm处比色,由标准曲线法计算出酶活性;通过L9(34)即3因素3水平的正交实验设计,测定乳糖酶活性测定的最适反应调节.2.取小鼠肠道上中下三段各10cm测定酶分布情况.结果:1.经实验确定测定小鼠小肠粘膜乳糖酶活性的最适pH为4.6,水浴反应75min,加入显色剂3.0ml显色45min.2.babl/c小鼠的小肠乳糖酶活性随肠段分布不同无显著性差异.结论: babl/c小鼠可以应用TGO显色剂来测定测定酶活性,其最适条件为:PH4.6,浴时间75min,显色剂:显色时间45min,且乳糖酶在babl/c小鼠肠段上分布无差异,肠段的位置对实验数据的影响可忽略.
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