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目的:探讨人类心肌匀浆上清液对骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)诱导分化的影响及相关基因的时序表达。
方法:体外分离培养人类MSCs,传至第四代加入自体心肌匀浆上清液,持续作用两周,相差显微镜下观察MSCs形态变化,免疫荧光方法鉴定心肌特征性肌动蛋白α(α-actin)和肌钙蛋白(cTnT)的表达,应用半定量RT-PCR技术分析Nkx-2.5、GATA-4、MEF-2C、α-MHC、cTnT等相关基因在分化过程中的动态时序表达。
结果:经心肌匀浆上清液诱导后,MSCs体积变大,立体感增强,形态近似棒状。诱导两周时α-actin及cTnT阳性细胞比例分别为25.53%和23.48%。Nkx-2.5、GATA-4、MEF-2C基因在诱导后三天表达开始增强,其中GATA-4、MEF-2C诱导后五天达高峰,以后维持在较高水平,Nkx-2.5则随诱导时间逐渐增强;α-MHC、cTnT基因诱导前无表达,于诱导第三天出现表达,以后维持在高水平。
结论:心肌匀浆上清液对MSCs具有定向诱导作用,在此过程中,伴随着Nkx-2.5、GATA-4、MEF-2C、α-MHC和cTnT基因的时序表达变化。