【摘 要】
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利用反转录PCR(RT-PCR)技术扩增出猪瘟病毒石门株(CSFV Shimen strain)囊膜糖蛋白E2全基因,再以E2基因为模板扩增其中适于在E.coli中表达且抗原性较好的基因片段(E2蛋白A/D抗原区基因序列),将扩增的两片段串联插入原核表达载体pET-32a(+)中,构建成重组质粒pET-2e,将pET-2e转化受体菌BL21(DE3),经IPTG诱导,重组转化菌可高效表达目的基因,
【机 构】
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南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室(江苏南京)
【出 处】
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中国畜牧兽医学会2004年学术年会暨第五届全国畜牧兽医青年科技工作者学术研讨会
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利用反转录PCR(RT-PCR)技术扩增出猪瘟病毒石门株(CSFV Shimen strain)囊膜糖蛋白E2全基因,再以E2基因为模板扩增其中适于在E.coli中表达且抗原性较好的基因片段(E2蛋白A/D抗原区基因序列),将扩增的两片段串联插入原核表达载体pET-32a(+)中,构建成重组质粒pET-2e,将pET-2e转化受体菌BL21(DE3),经IPTG诱导,重组转化菌可高效表达目的基因,表达量平均可达菌体蛋白总量的36.6﹪.免疫印迹表明,所表达的蛋白是CSFV特异的.实验结果表明,克隆在硫氧还蛋白(Thioredoxin protein,TrxA)下游的目的基因与TrxA获得了高效融合表达,并且目的蛋白具有免疫学反应活性,为以CSFV重组蛋白作为抗原建立检测CSF血清抗体水平方法的建立奠定了基础.
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