【摘 要】
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根据GenBank登录的Bacillus几丁质酶基因的同源性,设计出可扩增部分几丁质酶基因的一对引物BFL1/BFL2,采用PCR方法扩增出WB-7部分几丁质酶基因序列.将PCR产物纯化回收后直接
【机 构】
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福建农林大学生命科学院生物工程系,福州,350002
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根据GenBank登录的Bacillus几丁质酶基因的同源性,设计出可扩增部分几丁质酶基因的一对引物BFL1/BFL2,采用PCR方法扩增出WB-7部分几丁质酶基因序列.将PCR产物纯化回收后直接测序,经在线的Blast软件进行同源性分析表明:它与chiB的相应部分的同源性将近100﹪.根据这一结果,可利用引物BFL1/BFL2来鉴定Bt的几丁质酶基因,在所鉴定的另外22株苏云金杆菌中有18株具有几丁质酶基因.再设计出扩增全长几丁质酶基因的一对引物QCL1/QCL2,得到了包含全部氨基酸信息的几丁质酶基因,命名为chi7,Southern杂交证实了这一结果.利用PCR产物克隆载体pGEM-Teasyvector与chiA连接,构建出重组克隆载体pT-CHI,测序并进行同源性分析,chi7与其他Bt几丁质酶有90﹪以上的同源性.
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