【摘 要】
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目的 构建P311腺病毒表达载体并观察其在转染人表皮干细胞(human epidermal stem cells,hESCs)后P311的表达情况。方法 扩增含有P311的全长cDNA,然后亚克隆至穿梭质粒pAd
【机 构】
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第三军医大学西南医院烧伤研究所,创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室,疾病蛋白质组学重庆市市级重点实验室 400038
【出 处】
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第十届全国烧伤救治专题研讨会暨福建省第八次烧伤外科学术研讨会
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目的 构建P311腺病毒表达载体并观察其在转染人表皮干细胞(human epidermal stem cells,hESCs)后P311的表达情况。方法 扩增含有P311的全长cDNA,然后亚克隆至穿梭质粒pAdTrack-CMV中,再与pAdEasy-1质粒在大肠杆菌BJ5183中进行同源重组产生含有P311的骨架质粒(pAdEasy/P311)。将验证正确的pAdEasy/P311用Pac Ⅰ酶切后转染293细胞,从而包装出P311的腺病毒表达载体(Adv-P311)。用Adv-P311转染hESCs,并采用RT-PCR和荧光激活细胞分类计数的方法检测其表达情况。结果PCR、酶切和测序结果证明,成功地将P311全长cDNA克隆到骨架质粒中,并包装出腺病毒表达载体。同时Adv2-P311转染hESCs后可有效地增加hESCs 中P311的表达。结论P311的腺病毒表达载体的成功构建和其在hESCs中的表达,为研究P311在干细胞移植中的应用奠定基础。
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