【摘 要】
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为了研究蓝舌病1型病毒VP2蛋白体外表达产物免疫反应性,为蓝舌病1型病毒VP2蛋白型特异性表位定位研究奠定基础.本试验根据已发表的蓝舌病1型病毒Y863毒株L2基因序列设计合成
【机 构】
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云南省热带亚热带动物病毒病重点实验室,云南昆明650224
【出 处】
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云南省畜牧兽医学会2017年学术年会
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为了研究蓝舌病1型病毒VP2蛋白体外表达产物免疫反应性,为蓝舌病1型病毒VP2蛋白型特异性表位定位研究奠定基础.本试验根据已发表的蓝舌病1型病毒Y863毒株L2基因序列设计合成特异性BTV-1PCR克隆引物.通过RT-PCR方法扩增L2基因,将纯化的L2基因克隆至pEASY-Blunt E1表达载体,通过T7F、T7R,T7F、BTVR和BTVF、T7R引物经PCR进行重组质粒鉴定,将阳性重组L2质粒克隆BL21(DE3)感受态细胞进行表达,对获得纯化的BTV-1VP2重组蛋白进行免疫印迹、ELISA、阻断ELISA分析.结果显示,BTV VP2蛋白在pEASY-Blunt E1载体上以包涵体形式表达,通过Ni-NTA亲和层析,160mmol/L和200mmol/L咪唑是洗脱BTV VP2蛋白表达产物的最佳浓度.纯化获得N末端携带多聚组氨酸标签的BTV VP2重组蛋白,分子量约105ku,免疫印迹、ELISA、阻断ELISA结果证明重组BTV-1VP2蛋白能与蓝舌病1型病毒型特异性抗发生特异性结合,且此结合能被BTV-1阻断.本试验表明;通过原核表达载体pEASY-Blunt E1表达的BTV-1重组VP2蛋白具有良好免疫反应性,为蓝舌病1型病毒VP2蛋白型特异性表位定位研究奠定了基础.
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