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建立了用HPLC法测定虫草菌丝体中甘露醇的方法，色谱柱为Bio-Rad AMINEX HPX-87C糖分析柱(300 mm×7.8 mm，9 μm)，柱温为60℃，流动相为超纯水，流速为0.5 mL／min，示差折光检测器(RID)检测。在该色谱条件下测定了虫草菌丝体粉制品中甘露醇的含量，平均质量分数为4.19％，加样回收率为99.0％，RSD为0.57％(n=6)。本方法样品前处理简单，测试简便、灵敏，结果可靠，可作为虫草菌丝体及其他保健食品中甘露醇含量质量控制的定量方法。