【摘 要】
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目的 构建入细胞分化抑制因子3(Id3)重组腺病毒载体,制备并鉴定人Id3重组腺病毒,为研究Id3基因在细胞中的表达及其对细胞功能的影响奠定基础。方法 以pUC57-Id3为模板扩增人Id3基因,将其克隆到质粒pUC18中,pUC18-Id3经EcoRI和Hind Ⅲ 双酶切补平之后与载体pAxCAwtit连接,构建重组粘粒载体pAxCAwtit-Id3,包装试剂盒包装重组粘粒,转染大肠杆菌,鉴定
【机 构】
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南京师范大学生命科学学院 南京军区南京总医院全军临床检验医学研究所
【出 处】
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第5届全国检验与临床学术会议暨国际检验与临床高峰论坛
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目的 构建入细胞分化抑制因子3(Id3)重组腺病毒载体,制备并鉴定人Id3重组腺病毒,为研究Id3基因在细胞中的表达及其对细胞功能的影响奠定基础。方法 以pUC57-Id3为模板扩增人Id3基因,将其克隆到质粒pUC18中,pUC18-Id3经EcoRI和Hind Ⅲ 双酶切补平之后与载体pAxCAwtit连接,构建重组粘粒载体pAxCAwtit-Id3,包装试剂盒包装重组粘粒,转染大肠杆菌,鉴定正确后大量制备重组pAxCAwtit-Id3,经酶切线性化后,用脂质体法转染HEK293A细胞,包装成重组腺病毒Ad-Id3,制备高滴度的重组腺病毒Ad-Id3,利用TCID50法计算重组腺病毒滴度,经RT-PCR及western blot检测Id3基因的表达。
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