【摘 要】
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目的：构建7段CA153串联重复序列的原核表达载体,表达纯化重组蛋白,并制备其抗血清.方法：全基因合成7段CA153分子的重复序列,将目的基因导入PET32a+原核表达质粒中,构建7段CA153串联重复序列原核表达载体(PET-CAI53);转化至BL21(DE3),摸索并确定最佳表达条件;采用Ni柱亲和层析,纯化重组蛋白;western blot鉴定重组蛋白后,免疫新西兰大白兔,纯化制得其抗血清
【机 构】
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成都市第二人民医院检验科,四川成都610017
【出 处】
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四川省医学会第十六次检验医学学术会议
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目的：构建7段CA153串联重复序列的原核表达载体,表达纯化重组蛋白,并制备其抗血清.
方法：全基因合成7段CA153分子的重复序列,将目的基因导入PET32a+原核表达质粒中,构建7段CA153串联重复序列原核表达载体(PET-CAI53);转化至BL21(DE3),摸索并确定最佳表达条件;采用Ni柱亲和层析,纯化重组蛋白;western blot鉴定重组蛋白后,免疫新西兰大白兔,纯化制得其抗血清.
结果：成功构建7段CA153串联重复序列原核表达质粒(PET-CA153);经SDS-PAGE电泳结果最终确定重组CA153在15℃,6h,IPTG0.5mmol/L的条件下得到高效可溶性表达;SDS-PAGE及western blot结果显示经Ni-NTA亲和系统纯化,得到了纯度较高重组CA153蛋白,将纯化的蛋白免疫新西兰大白兔后制得纯度和特异性较高多克隆抗体.
结论：成功建立高效的重组CA153原核表达系统,纯化并制得其抗血清.
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