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目的:区分对HLA-A,B,C,DRB1,DQB1高分辨确认分型检测中存在的模棱两可组合(Ambiguity)结果.
方法:采用SBT方法进行HLA-A,B,C,DRB1,DQB1高分辩基因分型;采用SSOP方法进行HLA-A,B,C,DRB1中高分辩分型及DQB1中分辩基因分型;对SBT及SSOP检测后仍存在的Ambiguity,再采用Sequence Specific Primer(SSP)、Group Specific Primer(GSP)、Group Sequence Specific Primer(GSSP)或Sequence of Primer Targets Testing(SSPT)方法进一步区分.
结果:(1)SSP方法:可解决大部分Ambiguity;SSP不能解决的可采用GSP、SSPT或GSSP区分.(2)GSP方法:能解决部分SSP无法区分的CWD1,CWD2/CWD3,Rare组合,GSP仍不能区分的可以采用GSSP区分.(3)GSSP方法:可区分大部分CWD1,CWD2/CWD3,Rare组合,包括SSP或GSP能或不能区分的CWD1,CWD2/CWD3,Rare组合,如SSP和GSP均能区分的C*03:03:01,14:03/C*03:04:01,14:10;SSP不能区分而GSP能区分的B*40:01,48:01:01/B*40:80,48:03:01;SSP和GSP均不能区分的B*15:01,15:02:01/B*15:15,15:25:01.(4)SSPT方法:HLA-B,C位点Exon5,6,7测序引物用于区分CWD1/CWD2,CWD3,包括SSP能或不能区分的CWD1/CWD2,CWD3,例C位点Exon5用于区分SSP不能区分的C*04:01/04:82;B位点Exon5用于区分SSP能区分的B*0705/07:06,C位点Exon5,6用于区分SSP能区分的C*07:01/07:06/07:18,C位点Exon6用于区分SSP能区分的C*08:01/08:22.
结论:CWD1/CWD2,CWD3和CWD1,CWD2/CWD3,Rare为最常见的需要区分的Ambiguity类型,首选SSPT方法区分CWD1/CWD2,CWD3,没有SSPT试剂的再采用SSP方法;首选GSSP方法区分CWD1,CWD2/CWD3,Rare,没有SSPT试剂的再采用SSP或GSP方法.