【摘 要】
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从鸡骨髓细胞中分离提取总RNA,经过反转录PCR(RT-PCR)扩增出鸡β-防御素-1(Gal-1)cDNA.与载体pGEM-T Easy相连,经克隆测序表明扩增出的cDNA碱基数为198bp,与发表了的Gal-1cDN
【机 构】
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华南农业大学动物科学院(广东广州)
【出 处】
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中国畜牧兽医学会禽病学分会第12次学术研讨会
论文部分内容阅读
从鸡骨髓细胞中分离提取总RNA,经过反转录PCR(RT-PCR)扩增出鸡β-防御素-1(Gal-1)cDNA.与载体pGEM-T Easy相连,经克隆测序表明扩增出的cDNA碱基数为198bp,与发表了的Gal-1cDNA编码区碱基序列完全相同.核苷酸序列比较表明Gal-1与THP-1具有最高的85.4﹪同源性.氨基酸序列比较Gal-1与THP-1同源性最高,为72.7﹪.将Gal-1基因成熟肽片断插入到酵母表达载体pPICZα-C,构建重组表达载体pPICZα-C-gal-1,电转入表达宿主菌X-33,Zeocin抗生筛选重组菌株.挑取阳性菌株经甲醇诱导表达,Tricine-SDS-PAGE电泳发现在约4.5kD位置出现预期条带.对其抗菌活性检测发现具有抗大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌等细菌的活性.反相高效液相色谱表明阳性菌株表达产物与标准品在柱子中保留时间一致.
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