【摘 要】
：
目的 采用RNA干扰技术研究人支气管上皮(HBE)细胞中5-脂氧合酶(5-LOX)介导4-氨基联苯(4-ABP)氧化活化与DNA损伤,进一步为LOX作为介导前致癌物氧化活化的代谢途径提供更有效证据,并为利用LOX siRNA沉默LOX发挥防治间接致癌物的致癌作用提供新线索.方法 用4-ABP分别染毒正常HBE细胞、载体对照(NC)细胞和经5-LOXshRNA处理细胞24 h,通过MTT实验检测4-
【机 构】
：
中南大学公共卫生学院劳动卫生与环境卫生学系,湖南长沙410078 中南大学公共卫生学院劳动卫生与环
论文部分内容阅读
目的 采用RNA干扰技术研究人支气管上皮(HBE)细胞中5-脂氧合酶(5-LOX)介导4-氨基联苯(4-ABP)氧化活化与DNA损伤,进一步为LOX作为介导前致癌物氧化活化的代谢途径提供更有效证据,并为利用LOX siRNA沉默LOX发挥防治间接致癌物的致癌作用提供新线索.方法 用4-ABP分别染毒正常HBE细胞、载体对照(NC)细胞和经5-LOXshRNA处理细胞24 h,通过MTT实验检测4-ABP对各组细胞存活率的影响；用Western blot检测各组细胞5-LOX蛋白表达；用单细胞凝胶电泳实验检测各组的DNA损伤情况.比较4-ABP染毒对5-LOXshRNA细胞组与经特异性5-LOX抑制剂AA861处理组的细胞毒性和DNA损伤情况.结果 正常HBE组、NC组经4-ABP染毒24 h后,每组随着4-ABP浓度的增加,吸光度逐渐下降,细胞存活率降低,各浓度组间差异有统计学意义(P＜0.05)；相同染毒浓度下5-LOXshRNA处理组比NC组的细胞存活率高,特异性5-LOX抑制剂AA861组比阴性对照组细胞存活率高,差异均具有统计学意义(P＜0.05).4-ABP染毒均可以使正常HBE组、NC组和5-LOXshRNA处理组的5-LOX蛋白表达增加；加入AA861对5-LOX蛋白表达基本没有影响.经4-ABP染毒后彗星细胞阳性率增加,彗星图像尾部长度增长,尾距变大；正常HBE组经shRNA处理或加入抑制剂AA861后,彗星细胞阳性率下降,彗尾长度变短,且shRNA处理组变化更明显.结论 5-LOXshRNA和特异性5-LOX抑制剂AA861均可以抑制4-ABP引起的细胞毒性和DNA损伤,5-LOXshRNA抑制效果更为显著,更有效表明5-LOX参与了HBE细胞中4-ABP的氧化活化,可能与后者的致癌作用有关,提示LOX siRNA沉默LOXRNA干扰技术可能有利于作为4-ABP致癌作用防治的线索.
其他文献
目的 根据OECD(经合组织)测试指南439规定的方法,验证使用EpiSkin表皮模型(中国生产)的皮肤刺激性体外测试方法的可实施性和结果的可靠性。国家质检总局的四个直属单位：中国检科院、北京局、上海局和广东局,以及欧莱雅中国研发和创新中心共同参与了此次验证研究项目,为在中国建立皮肤刺激性体外替代测试方法的相关标准提供科学的依据和认证的数据基础。方法 此次研究采用的测试方法是根据ECVAM(欧洲体
目的 建立体外皮肤刺激性替代试验的新方法小鼠皮肤功能完整性试验(SIFT),并初步评价该方法在皮肤刺激性评价中的应用价值.方法 制作离体皮肤固定装置,用正常大鼠皮片固定于装置后的TER值及TEWL值变化及病理组织学变化来评价其可行性.选用12种不同化学物初步建立SIFT试验,并选用36种化学物进行SIFT试验,采用SPSS(ver16.0)统计软件对实验结果进行统计分析,评价SIFT方法的重复性、
目的 建立快速高效的体外微核试验高通量筛选方法,并应用该方法检测香兰素、尼泊金甲酯和对苯二胺三种化学物的遗传毒性.方法 上述3种化学物分别设10个染毒剂量,香兰素剂量范围1.22～625 μg· ml-1、尼泊金甲酯剂量范围2.44～1250 μg·ml-1、对苯二胺剂量范围2.44～1250 μg·ml-1,同时设阳性对照(+S9为10 μg·m；-1环磷酰胺、-S9为0.50 μg·ml-1丝
甲基苯丙胺(MA)属于苯丙胺类(PEA)兴奋剂,苯乙胺是MA中的重要成分.MA具有药物依赖性(主要是精神依赖性)、中枢神经兴奋、致幻、食欲抑制和拟交感效应等药理、毒理学特性,其毒性可以引起机体多内脏器官的损害,其中横纹肌溶解是MA及PEA急性中毒中常见的症状.MA滥用与发生横纹肌溶解与否与哪些因素相关,如何提防吸毒者产生的横纹肌溶解,其产生的相关机制仍不明确,其今后的研究方向及现有研究中所存在的不
目的 进一步揭示1-甲醇基芘(1-MP)的代谢活化机制和遗传毒作用特征.方法 采用稳定表达人CYP2E1和人硫酸基转移酶(SULT) 1A1的V79细胞系(V79-hCYP2E1-hSULT1A1),探讨1-MP和1-HMP的细胞毒(MTT法)作用、致突变(Hprt位点)作用和诱发细胞微核的效应,并观察相应酶抑制剂对上述效应的影响.结果 二受试物对缺乏生物转化酶的V79对照细胞均无任何毒作用,而对
目的 苯是一种普遍存在的环境污染物,长期接触苯主要引起血液毒性,导致白细胞减少、骨髓抑制,甚至再生障碍性贫血及白血病.苯的血液毒性机制,涉及代谢活化、氧化损伤、染色体与基因突变、表遗传改变等,但迄今尚未完全阐明.代谢组学是研究生物体内小分子代谢物与生理病理变化的相对关系的研究方式.用代谢组学方法揭示的生物化学变化可以与传统手段的测定结果相联系,更容易发现毒物毒性作用的生物化学物质基础、作用机制及与
目的 取马兜铃酸-Ⅰ (AA-Ⅰ)致比格犬亚急性肝炎性损伤组织,经microRNAs芯片,qRT-PCR分析.对所获6个显著差异表达miRNAs进一步进行邻近靶基因预测,以获取基于microRNA簇的转录后网络调控生物信息,指导进一步分子生物学深入研究.方法 (1)通过对miRBase数据库(http.//mirbase.org/)的检索,找出所有跨度小于40 kb的microRNA簇,以与mic
目的 大鼠腹腔注射脂多糖(LPS)引起学习与记忆能力损伤的基础上,进一步探索损伤后皮质与海马前列腺素E2以及白三烯C4的合成变化.方法 利用Morris水迷宫实验评价大鼠腹腔给予LPS(2 mg·kg-1)后学习与记忆能力损伤.探索外周炎症刺激对大鼠大脑皮质及海马中PEG2和LTC4的合成变化.ELISA法检测PEG2水平,Western blot检测微粒体前列腺素E合酶1(mPEGS-1)、微粒
目的 建立马兜铃酸-Ⅰ(AA-Ⅰ)致beagle犬亚急性肝损伤模型,检测炎症细胞因子白介素-6(IL-6)引发肝组织非特异性炎症及IL-6/STAT3炎症通路激活状态,为进一步研究炎症恶性转变分子网络调控提供依据.方法 Beagle犬连续口服AA-Ⅰ(3 mg·kg-1·d-1)10d,第11天处死,搜集肝样本,部分放入4％福尔马林固定后石蜡包埋切片,部分液氮速冻后-80度储存备用.采用H&E染色
目的 研究离子辐射剂量反应关系的种种可能性。方法 本研究利用系统毒理学的方法，建立细胞周期停滞模型，并与干扰模型与两步的癌症克隆增长模型相连接，模拟出了J型剂量反应曲线存在的可能性。具体方法是首先将模型模块化，分为系统模块、干扰模块以及病理模块。系统模块描述了细胞周期关卡控制传导途径。干扰模块描述了离子辐射引起的细胞周期关卡停滞。病理模块利用了两步的癌症克隆增长模型。各模块的数学模拟方式是利用系统