【摘 要】
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利用高保真PCR技术克隆了唐鱼(Tanichthys albonubes)、斑马鱼(Danio rerio)和罗非鱼(Oreochromis niloticus)β-actin 5端侧翼区的启动调控区及部分开放阅读框,测序结果表明
【机 构】
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中国水产科学院珠江水产研究所,广东,广州,510380
【出 处】
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2006第二届北京实验动物科学国际论坛
论文部分内容阅读
利用高保真PCR技术克隆了唐鱼(Tanichthys albonubes)、斑马鱼(Danio rerio)和罗非鱼(Oreochromis niloticus)β-actin 5端侧翼区的启动调控区及部分开放阅读框,测序结果表明,所克隆得到的三种鱼类β-actin其长度分别为1465bp、1654bp和1733bp.但均包括一段长为108bp左右的β-actin基因上游调控序列、不翻译的第一个外显子和第一个内含子以及部分开放阅读框(长度为90bp).其中上游调控序列中含有对转录过程起着重要作用的元件:CCAAT Box,TATA Box,CArG Box.开放阅读框均编码一段含30个氨基酸的多肽,此多肽具有高度的保守性,其中唐鱼的与斑马鱼的同源性为100％;与罗非鱼的同源性为96.7％.将唐鱼β-actin的启动子插入不含启动子的红色荧光表达载体pDsRed2-1中,构建以红色荧光蛋白为报告基因的重组表达载体,序列测定证实启动子已正确插入到表达载体中.通过显微注射技术将带有唐鱼启动子的红色荧光表达载体(TB-Red)线性化后注射到唐鱼的受精卵中,荧光显微镜下观察外源基因在胚胎的表达.结果表明:在孵化后72h可观察到唐鱼仔鱼体表发出的红色荧光,证实了唐鱼β-actin基因启动子具有有效的基因表达活性.
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