【摘 要】
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根据禽致病性大肠杆菌IMT5155毒力相关基因E9的序列,设计并合成了1对特异性引物,以IMT5155菌株的基因组DNA为模板扩增了E9基因所在0RF的部分序列。将PCR产物进行了T／A克隆,转
【机 构】
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南京农业大学动物医学院农业部动物疫病诊断与免疫国家重点开放试验室,江苏 南京 210095 河南省康星药业有限公司,河南 中牟 451464
【出 处】
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第五届南京农业大学畜牧兽医学术年会----家禽高效养殖与重大疫病防控研讨会
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根据禽致病性大肠杆菌IMT5155毒力相关基因E9的序列,设计并合成了1对特异性引物,以IMT5155菌株的基因组DNA为模板扩增了E9基因所在0RF的部分序列。将PCR产物进行了T／A克隆,转化大肠杆菌,鉴定成功获得目的片段后,将其定向亚克隆到pET-28a(+)载体中,构建了原核表达质粒pET-28a-E9,并将其转化至大肠杆菌BL21 (DE3)感受态细胞中,经1mmol/L异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导和SDS—PAGE分析,出现了与预期目的蛋白一致的外源蛋白带(32．2 ku)。Western-blot分析表明,该融合蛋白具有免疫反应性。对重组蛋白进行纯化后免疫动物进行抗体效价测定,进一步分析重组蛋白的相关生物学功能,分别进行了细胞毒性试验、动物试验、细胞黏附与黏附影响试验。
结果表明,该蛋白没有细胞毒性,对小鼠亦无毒性,有一定的黏附作用。
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