【摘 要】
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目的:观察小鼠缺血性卒中发展过程中自噬发生情况,探讨自噬脑在缺血性脑卒中损伤中作用和经典型蛋白激酶C(c PKC)γ参与自噬的可能分子机制。方法:利用脑中动脉栓塞(MCAO)1h/
【机 构】
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首都医科大学神经生物学系,北京脑重大疾病研究院;
【基金项目】
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国家自然科学基金(31171147);北京市自然科学基金(7141001,7144188);IATN国际合作种子基金(PXM2014-014226-000006)
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目的:观察小鼠缺血性卒中发展过程中自噬发生情况,探讨自噬脑在缺血性脑卒中损伤中作用和经典型蛋白激酶C(c PKC)γ参与自噬的可能分子机制。方法:利用脑中动脉栓塞(MCAO)1h/再灌注(R)1、3和7d,建立C56BL/6J野生(WT)和c PKCγ基因敲除(KO)小鼠缺血性脑卒中模型;应用2,3,5-氯化三苯基四唑(TTC)和尼氏(Nissl)染色,检测脑梗死和神经细胞丢失程度;应用Rodriguez神经行为学评分法,评估神经功能损伤情况;应用蛋白免疫印迹(Western blot)技术,检测自噬相关蛋白LC-3Ⅱ/I比值和Beclin-1蛋白表达水平。结果:经1h MCAO/R 1d、3d和7d处理后,WT和KO鼠脑均出现明显的缺血性梗死灶和神经功能损伤(p<0.05,每组n=6),且c PKCγ基因敲除可使脑梗塞体积增大、神经细胞丢失增多和神经功能损伤加重(p<0.05,每组n=6);c PKCγ基因敲除可显著提高1h MCAO/R 1d、3d和7d鼠脑内自噬相关蛋白LC-3Ⅱ和Beclin-1蛋白水平(p<0.05,每组n=6)。同时发现,侧脑室注射自噬抑制剂3-MA,可显著降低1h MCAO/R1d、3d和7d处理的WT鼠脑内LC-3Ⅱ和Beclin-1蛋白水平(p<0.05,每组n=5),而对缺血性卒中KO鼠脑内LC-3Ⅱ和Beclin-1蛋白水平影响不显著。结论:缺血性卒中鼠脑内可能存在自噬性损伤,且内源性c PKCγ的脑保护作用可能是通过特定信号转导通路调节自噬来实现的。
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