【摘 要】
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目的 获得阿部鲻鰕鯱细胞色素P450 1C基因中间序列,为该基因全序列的克隆、建立实时荧光定量PCR检测该基因mRNA表达水平的方法奠定基础,也为CYP 1C基因用于检测环境污染
【机 构】
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中国水产科学研究院珠江水产研究所,广州510380
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目的 获得阿部鲻鰕鯱细胞色素P450 1C基因中间序列,为该基因全序列的克隆、建立实时荧光定量PCR检测该基因mRNA表达水平的方法奠定基础,也为CYP 1C基因用于检测环境污染物暴露的生物分子标志物奠定基础.方法 阿部鲻鰕鯱经1mg/L苯并芘浸泡24h后,根据GenBank已登录的斑马鱼(Danio rerio)、罗非鱼(Oreochromis niloticus)、斜带石斑鱼(Epinepheluscoioides)、尖口鲷(Stenotomus chrysops)、三刺鱼(Gasterosteus aculeatus)等鱼类CYP 1C基因序列的保守区域设计简并引物,采用Trizol试剂盒提取肝细胞总RNA,通过RT-PCR的方法获得CYP1C基因部分序列,并对该片段进行克隆、序列测定和分析.结果 利用简并引物扩增得到一946bp目的片段,编码315个氨基酸,经序列测定证实为阿部鲻鰕鯱细胞色素P4501C基因,与尖口鲷CYP1C2、三刺鱼CYP1C2、虹鳟CYP1C2、斑马鱼CYP1C2、斑马鱼CYP1C1氨基酸序列比对,同源性分别为81.1％、80.1％、77％、74.0％、72.2％.结论 1mg/L Bap浸泡鱼体,可以诱导阿部鲻鰕鯱CYP 1C基因的表达,CYP 1C基因中间序列的克隆可为该基因的检测提供基础.
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