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目的:动物毒性实验证实,炮制品藤黄(尤其是清水制藤黄)的毒性比生品藤黄的毒性具有明显的降低.本文将对生品藤黄经高温、高压或是高湿炮制处理后,采用LC-DAD-MS方法对炮制前后化学成分的变化进行研究,分析比较藤黄生品和各炮制品中的成分,确定变化产生成分的分子量和分析各成分的裂解规律.并通过制备液相色谱分离制备精制得到相应的成分,并采用1H-NMR、13C-NMR等技术分析鉴定化合物的化学结构.为探索有毒中药藤黄的炮制解毒的物质基础,进一步研究炮制解毒机理奠定物质基础.仪器:UPLC-MS联用系统:Acquity TM超高效液相色谱仪(美国Waters公司),Acquity TM四元泵,PDA eλ检测器,全自动进样器;Q-TOF microTM质谱仪:电喷雾离子化接口的飞行时间质谱检测器.;质谱工作站:Masslynx4.1.色谱条件:色谱柱:ACQUITY UPLC HSS T3 (1.8μm,2.1mm× 100mm),流动相:乙腈-0.1%甲酸(80∶20),流速:0.4mL/min,柱温:40℃.质谱条件:离子化方式:正离子;检测范围:0-1000;毛细管电压(Capillary):3000V;样品孔电压(Sample Cone):30V;检测电压(Detector Voltage):2200V;脱气剂温度(Desolvation Temp):300℃2;离子源温度(Source Temp):100℃;碰撞能量(Collsion Energy):5.0V.方法:取藤黄酸、藤黄生品以及各炮制品(清水制、豆腐制、高压制)粉末加乙腈超声提取后,注入液质联用仪分析,得到藤黄生品以及各炮制品(清水制、豆腐制、高压制)的LC-MS谱图.结果:藤黄生品以及各炮制品(清水制、豆腐制、高压制)的UPLC-DAD见图1,由图可见,相对于生品藤黄,三种炮制品都有一定的化学成分的变化,其中以清水制藤黄的化学成分变化最明显,其次是豆腐制藤黄和高压制藤黄化学成分变化.清水制藤黄在tR=4.48min和4.71min出现的两个新增的成分(F4和F5).对两个化合物对应的质谱图进行分析,结果见图2,3显示保留时间为tR=4.48min的新增化合物F4以及保留时间为4.71min新增化合物F5的一级质谱可见m/z 629、m/z651、m/z573,分子离子峰[M+H]+为629,[M+Na]+为651,可以初步确定该化合物的分子量为628,与藤黄酸分子量相同.通过对藤黄生品和各炮制品的总离子流图比对,并提取离子分析,发现在tR=2.32min (F1),3.36min (F3)同样有两个新增的化学成分,其质荷比m/z均为647,对两个化合物对应的质谱图进行分析,显示保留时间为t=2.32min的新增化合物F1以及保留时间为3.36min新增化合物F3的一级质谱可见m/z 647、m/z629、m/z573,分子离子峰[M+H]+为647,可以初步确定该化合物的分子量为646.采用Waters600E制备液相分离精制相应的化学成分,按出峰顺序依次收集与炮制过程中新增化合相对应的各色谱馏分F1,F3,F4,F5.将收集的馏分合并,减压浓缩,并经液相进一步精制,红外低温干燥,分别得到化合物F1、F3、F4、F5.经UV,IR,NMR,MS确证化合物的化学结构.结论:化合物F4和F5为藤黄酸的同分异构体,F4解析为藤黄烯酸(gambogellic acid),F5解析为表藤黄烯酸(epigambogellic acid).化合物F1和F3为F4和F5的加水产物,F1解析为藤黄醇酸(gambogollic acid),F3解析为表藤黄醇酸(epigambogollic acid),其中F1和F3未见文献报道.