【摘 要】
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本项研究通过设计兼并引物扩增得到Hc-daf-2基因的EST序列,在此基础上利用RACE和GenomeWalker获得了Hc-daf-2基因的全长编码区和基因组DNA以及上游的启动子序列.生物信息学分析发现,编码区全长4215bp,5-UTR是150bp,3-UTR是676bp,上游启动子共获得4091 bp.进一步分析发现,Hc-DAF-2存在细胞外和细胞内两大功能区域,而在胞内功能区内存在典型
【机 构】
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农业微生物国家重点实验室,动物医学院,华中农业大学,中国 School of Veterinary
【出 处】
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中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第七次代表大会暨第十二次学术研讨会
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本项研究通过设计兼并引物扩增得到Hc-daf-2基因的EST序列,在此基础上利用RACE和GenomeWalker获得了Hc-daf-2基因的全长编码区和基因组DNA以及上游的启动子序列.生物信息学分析发现,编码区全长4215bp,5-UTR是150bp,3-UTR是676bp,上游启动子共获得4091 bp.进一步分析发现,Hc-DAF-2存在细胞外和细胞内两大功能区域,而在胞内功能区内存在典型的ATP结合(GXGXXG)位点,催化位点,Mg2+结合位点(DFG)以及高度保守的NPXY功能域.通过RT-PCP对其转录水平分析发现,Hc-daf-2基因在捻转血矛线虫的各个时期(虫卵、幼虫以及成虫)均会发生转录,并且在L3期转录水平有所上升.另外,通过异源转基因的方法对其启动子进行分析,发现其主要定位于秀丽新杆线虫的头部神经节.随后,通过异源基因救援法分析发现,捻转血矛线虫胰岛素样受体基因能够对秀丽新杆线虫CB1370突变株起到部分救援的作用.本项研究发现,Hc-daf-2基因与秀丽新杆线虫daf-2在结构上高度保守,而在功能上存在部分相似性.
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