【摘 要】
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目的:构建人源pEGFP-C1-CIRP (pEGFP-C 1-hCIRP)质粒,瞬时转染HK-2细胞.方法:在PubMed中Nucleotide条目下查找hClRP mR人源NA的序列,用高保真RT-PCR法扩增该mRNA的CDS序列(上游引物为CGGAATTCATGGCATCAGATGAAGGCA,下游引物为CGGGA TCCAGCCA TTGGAAGGACGAT),限制性内切酶BamH I和
【机 构】
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武汉大学中南医院,武汉大学肝胆疾病研究院,武汉大学移植医学中心,移植医学技术湖北省重点实验室,湖北武汉
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目的:构建人源pEGFP-C1-CIRP (pEGFP-C 1-hCIRP)质粒,瞬时转染HK-2细胞.方法:在PubMed中Nucleotide条目下查找hClRP mR人源NA的序列,用高保真RT-PCR法扩增该mRNA的CDS序列(上游引物为CGGAATTCATGGCATCAGATGAAGGCA,下游引物为CGGGA TCCAGCCA TTGGAAGGACGAT),限制性内切酶BamH I和EcoR I酶切PCR产物及pEGFP-C1空载质粒,纯化后用T4 DNA连接酶行连接反应,转化DH5α菌株,扩增后提取质粒,行双酶切鉴定及测序鉴定.测序正确的质粒于六孔板内用Lipofectamine 2000方法转染至HK-2细胞,通过观察细胞绿色荧光的表达,应用Western blot方法检测目的蛋白,分析转染效率.结果:成功构建pEGFP-C1-hCIRP质粒,双酶切鉴定见目的片段,测序鉴定无突变.在HK-2细胞中转染成功,荧光显微镜及Western blot方法证实转染效率可.结论:hCIRP基因mRNA的CDS序列能完整接入pEGFP-C1质粒,并能在真核细胞中获得满意表达.
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目的:通过建立稳定的家兔脑死亡模型,检测肝脏形态及功能变化,并应用蛋白质组学方法筛选脑死亡状态下肝脏的差异蛋白并予以证实,为肝脏供体质量评估提供实验依据.方法:健康雄性新西兰家兔48只,随机分为3个大组,每组16只,每个大组再分为脑死亡组和假手术组,每组8只.3个大组分别于处理后2、6及8 h收集血液及肝脏组织,生化分析仪检测血清ALT、AST水平,HE染色观察肝脏的形态学改变,双向凝胶电泳、胶图
目的:探讨线粒体醛脱氢酶(Aldehyde Dehydrogenase 2,ALDH2)在脑死亡家兔肾脏中的作用.方法:健康雄性新西兰家兔60只,按随机数字表法随机分为30只脑死亡组和30只假手术组.脑死亡组采用颅骨钻孔置管后行缓慢间断颅内加压至脑死亡;后者颅骨钻孔置管,不加压.两组分别于处理后2、6、8h留取血标本及肾组织标本,生化分析仪检测血清肾功能水平,苏木素-伊红(HE)染色观察肾脏的形态
目的:建立家兔肾脏在体低温机械灌注与冷保存模型,探讨肾脏冷损伤中RUNX1的表达,为临床DCD供体肾脏质量的评估提供依据.方法:选取健康新西兰家兔18只,随机分为3组:正常组(4只),假手术组(4只),静态冷储存组(5只),低温机械灌注组(5只).家兔肾脏热缺血35分钟,再灌注1小时后行冷保存或机械灌注4小时,24小时后留取组织标本.采用Western Bolt、RT-PCR及免疫组化鉴定RUNX
目的:探讨低温机械灌注与冷保存对家兔肾脏质量的影响.方法:选取健康新西兰家兔18只,随机分为3组:正常组(4只),假手术组(4只),静态冷储存组(5只),低温机械灌注组(5只).家兔肾脏热缺血35分钟,再灌注1小时后行冷保存或机械灌注4小时,24小时后留取组织标本,HE染色及光镜观察肾脏的形态学改变.
目的:建立家兔肾脏在体低温机械灌注与冷保存模型,探讨肾脏冷损伤中MMP-9的表达情况,为临床DCD供体肾脏质量的评估提供依据.方法:选取健康新西兰家兔18只,随机分为3组:正常组(4只),假手术组(4只),静态冷储存组(5只),低温机械灌注组(5只).家兔肾脏热缺血35分钟,再灌注1小时后行冷保存或机械灌注4小时,24小时后留取组织标本.采用RT-PCR、免疫组化、免疫荧光的方法检测MMP-9的表
目的:探讨他克莫司(Tac)诱导移植术后糖尿病(PTDM)过程中对外周组织脂肪因子表达谱的影响,并探究其机制.方法:健康SD大鼠18只,随机分为三组:对照组(生理盐水,1mL· kg-1.d-1)、模型组(给予Tac,1mg.kg-1.d-1)、治疗组(Tac,1 mg.kg-1.d-1+罗格列酮,4 mg.kg-1.d-1).每天监测体重,每两天测空腹血糖,并于第14天检测OGTT及空腹胰岛素.
目的:对中国南方ESRD患者中HLA的表达进行分析,探讨HLA与ESRD的易感风险.方法:收集2000年1月～2013年12月在南方医科大学南方医院、中国人民解放军第458医院等16家移植中心登记等候肾脏移植的ESRD患者,年龄、性别不限.通过病历复习选择HLA基因分型资料完整的ESRD患者4904例.健康对照组为2686例南方汉族健康献血者.采用PCR-SSP分型方法进行HLA-A、B、DR基因
目的:探索地塞米松(DX)诱导骨髓来源抑制细胞(myeloid-derived suppressor cells,MDSC)在同种异系小鼠皮肤移植模型中的表达及免疫负调节作用及其机制方法:以雌性BALB/c小鼠皮肤为供体,雄性C57BL/6小鼠为受体,建立同种异系小鼠尾-背皮肤移植模型(n=40),将受者随机分为实验组和对照组,各20只,实验组每日地塞米松磷酸盐溶液(Dex)5 mg/kg腹腔注射
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