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目的：国内外研究均显示瘦素是肝纤维化发生的必需因素,但其机制尚不明确。本课题从基因、蛋白及酶活性三方面观察瘦素对肝星状细胞基质金属蛋白酶2(MMP2)合成与表达的影响,以探求瘦素促肝纤维化的作用机制。
材料和方法：以外源性大鼠重组瘦素为处理因素,肝星状细胞系HSC-T6为研究对象,分浓度梯度组和时间梯度组。用MTT实验观察不同浓度的瘦素对细胞增殖的影响,用RT-PCR法、ELISA法及酶谱法检测瘦素作用后HSC-T6细胞MMP2、mRNA、蛋白及酶活性的变化。
结果：1.MTT实验结果表明,500～3000ng/ml重组瘦素作用于HSC-T6细胞48小时,细胞的存活率均在90％以上,其中1500ng/ml及其以上浓度组细胞存活率明显增高。
2.500、1000、1500、2000ng/ml重组瘦素作用于HSC-T6细胞48h,1000ng/ml及其以上浓度瘦素可不同程度促进MMP2基因表达、蛋白分泌及酶活性。
3.浓度为1000ng/ml的重组瘦素作用于HSC-T6细胞12、24、36、48h,与对照组相应时间点表达水平相比,MMP2 mRNA与蛋白表达水平分别从24小时、12小时起明显升高,而在实验组与对照组内酶活性均于24小时达到高峰,呈先升高后降低趋势,且于12、24小时点实验组水平显著高于相应对照组水平。
结论：
1.瘦素可促进HSC-T6细胞的增殖。
2.瘦素可不同程度促进HSC-T6细胞MMP2 mRNA表达、蛋白分泌及酶活性的水平,提示瘦素可能通过MMP2异常降解细胞外与窦周隙正常的基底膜基质,促进HSCs的活化而促进肝纤维化的发展。