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从分泌抗肺腺癌单克隆抗体的杂交瘤细胞株(LC-1)抽提总RNA,反转录成cDNA;根据LC-1抗体基因的FR1和FR4保守区设计引物,PCR扩增出重链和轻链的可变区部分,重叠延伸PCR法将重链基因与修饰后的轻链基因连接,构建成LC-1单链抗体(single chain Fv,ScFv);改造后的ScFv与绿色荧光蛋白(GreenFluorescent Protein,GFP)基因连接,克隆到pProEx HTb,构建成表达质粒ProGFP-ScFv,并转化大肠杆菌JM109。IPTG诱导表达的融合蛋白在10%SDS-PAGE表现为70 KD的条带,主要以包涵体形式存在。Ni-NTA树脂纯化复性后的融合蛋白,ELISA检测表明该蛋白具有SPC-A-1肺腺癌细胞表面抗原结合活性;诱导后菌液在395 nm光波下显示出较强的绿色荧光,表明目的基因在原核系统中表达出具有双重活性的目的蛋白。
含GFP标签的ScFv可作为一种免疫染色的新型检测试剂,并提供了一种可行的临床上检测肺腺癌细胞的方法。