西瓜花叶病毒HC-Pro基因在毕赤酵母中的分泌表达与功能研究

• 作 者: 张建新[1]吴云锋[2]
• 机 构: 河南师范大学生命科学学院,河南 新乡,4530071 西北农林科技大举植保学院与陕西省农业分子生物学重点实验室,陕西 杨凌,712100
• 出 处: 第十一届微生物教学和科研及成果产业化研讨会
• 发表日期: 2007年期

利用RT-PCR方法扩增出西瓜花叶病毒HC-Pro的基因，长度为1371bp，并构建了真核表达质粒pPIC9K-WHC。将重组质粒经Sall单酶切后电转化Pichiapastoris GS115菌株，经PCR鉴定与G418、MD和MM培养基筛选,获得Mut+/His+表型高拷贝转化子,经1％甲醇诱导5d后，SDS-PAGE检测发酵液上清，在66KD处有一特异蛋白条带表达。Western blot鉴定表明.表达蛋白可以和HC-Pro蛋白抗血清发生结合反应。Far-western blot证明该蛋白能与西瓜花叶病毒CP蛋白结合，支持了HC-Pro蛋白协助传毒的“桥梁”学说。