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本文根据枯斑三生烟SKP基因(NtSKP1)的序列，设计一对分别含有特定酶切位点的特异引物，以重组质粒pMD18-SKP1为模板，扩增目的基因(约473 bp)片段。将反向目的片段插入中间载体pHANNIBAL的内含子右侧，再经Not I酶切回收约3443 bp的目的片段，插入到双元载体质粒pART27中，成功构建了含NtSKP1基因片段反向序列的植物表达载体pART27-skp1a，其转录产物能减弱目的基因的表达，将pART27-skp1a质粒导人根癌农杆菌LBA4404中并转化烟草叶片细胞，经选择分化培养，获得转基因烟草。