论文部分内容阅读
研究背景:T记忆性干细胞(TSCM)是具有自我更新和分化潜能的记忆性T细胞。近年,表型为CD-44lowCD62L+（鼠）和CD45RA+CD62L+（人）的CD3+CD8+T细胞先后被认为是TSCM,IL-7和IL-15联合作用被证明可以促进人TSCM的生成。我们认为TSCM细胞具有的干细胞特性能使其在体外培养中长期存活,并随着TEFF和TEM、TCM的死亡,仍然存活的细胞则是我们渴望得到的TSCM。基于这个思路,本研究为证实TSCM的存在,拟选择体外长期培养的方法来探究长期存活细胞的表型。目的:通过IL-7和IL-15联合作用扩增AFP抗原特异性的长期存活的CD8+T细胞,检测细胞表面CD44、CD62L分子的表达,初步鉴定长期存活的抗原特异性CD8+T细胞表型,为研究抗原特异性TSCM提供理论依据。方法:获取HLA-A2阴性健康个体的外周血单个核细胞（PBMC）,贴壁处理分别获得HLA-A2阴性的单核细胞和淋巴细胞。AFP158-166抗原肽加载到HLA-A2二聚体表面,获得的AFP158-166/HLA-A2 Dimer与HLA-A2阴性个体的单核细胞共孵育作为刺激细胞,其自身个体的淋巴细胞为效应细胞,共培养。在该培养体系中加入IL-7和IL-15,10天后给予重复刺激。连续8周流式细胞术检测CD3+CD8+细胞表面CD44和CD62L分子的表达,同时用FITC标记的AFP158-166/HLA-A2 Dimer检测细胞的抗原特异性。结果:细胞培养过程中加入IL-7和IL-15促进淋巴细胞扩增,延缓细胞死亡并维持细胞在良好状态。流式细胞术显示随着细胞培养时间的延长,CD62L+细胞的CD44荧光强度逐渐降低,CD62L+细胞与CD62L-细胞的CD44荧光强度比值随时间延长降低（1W:0.84VS 8W:0.47）,第1周主要是CD44highCD62L-和CD44highCD62L+细胞存在,第8周主要是CD44highCD62L-和CD44lowCD62L+细胞存在。抗原特异性的CD8+细胞比例逐渐降低（1W:1.1%VS 8W:0.6%）。结论:IL-7和IL-15促进抗原特异性的CD8+T细胞在体外长期存活,长期培养后细胞的表型为CD44highCD62L-和CD44lowCD62L+,提示这可能是抗原特异性TSCM的细胞表型,然这有待进一步实验来确证。