PHEV诱导神经细胞凋亡机制的研究

• 作 者: 贺文琦[1]兰云刚[1]赵家宽[1]李姿[1]吕晓玲[1]赵魁[1]陆慧君[2]成军[1]高丰[1]
• 机 构: 吉林大学 动物医学学院,吉林 长春 130062
• 出 处: 中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第二十次学术研讨会暨中国病理生理学会动物病理生理专业委员会第十九次学术研讨会
• 发表日期: 2014年期

目的:猪血凝性脑脊髓炎病毒(PHEV)属于β-冠状病毒属的成员,具有典型的嗜神经性,病毒感染后主要沿外周神经向中枢神经传递,并对神经元造成严重损伤.大量研究表明,脑神经元损伤与凋亡密切相关.PHEV感染是否可诱导宿主神经细胞凋亡还未见报道.因此,本研究对PHEV诱导神经元凋亡现象进行检测,进而对其诱导细胞凋亡的机制进行初步的探讨.
方法:以小鼠神经瘤母细胞(N2a细胞)作为脑神经元的细胞模型，将PHEV感染细胞后，观察CPE特点及细胞核的形态变化，应用Annexin V-FITC/PI法、DNA ladder等多种检测凋亡现象的方法进行检测分析。进而应用紫外分光光度法、免疫印迹技术、Real time PCR等方法对PHEV诱导N2a细胞凋亡的信号转导通路进行了初步的探讨。
结果:通过PHEV感染N2a细胞凋亡现象的检测发现PHEV能诱导宿主细胞凋亡，并且PHEV在感染N2a细胞的过程中促进了死亡受体蛋白Fas的表达，以及通过调节Bcl-2和Bax的表达促进细胞色素C的释放，并同时激活了caspase-3,-8和-9,表明PHEV诱导N2a细胞凋亡的过程中同时经过死亡受体途径和线粒体途径。其次，将经紫外线灭活的PHEV接种N2a细胞后，进行细胞凋亡检测;发现灭活的PHEV并不能诱导宿主细胞凋亡，表明PHEV诱导细胞凋亡的过程中依赖于病毒的复制增殖。最后，本研究应用caspase抑制剂有效抑制细胞凋亡后接种PHEV与正常接毒组进行比较，发现二者的病毒滴度差异不显著，表明PHEV增殖不依赖于凋亡的发生。
结论:本研究证明了PHEV能诱导细胞凋亡并初步探讨了PHEV诱导细胞凋亡过程中的信号通路。该研究结果为深入解析PHEV的分子致病机制提供了重要的研究基础。