【摘 要】
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酪氨酸tRNA合成酶(YyrRS)催化酪氨酸及其同源性tRNA共价结合.研究表明TyrRS可能与氨基酸感知有关,但是具体机制仍不明确,因此表达和纯化TyrRS将为后续功能研究提供重要基
【机 构】
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中国海洋大学农业部水产动物营养与饲料重点实验室,山东省青岛市鱼山路5号,266003
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酪氨酸tRNA合成酶(YyrRS)催化酪氨酸及其同源性tRNA共价结合.研究表明TyrRS可能与氨基酸感知有关,但是具体机制仍不明确,因此表达和纯化TyrRS将为后续功能研究提供重要基础.本实验构建了含人源TyrRS和谷胱甘肽S-转移酶(GST)标签的重组载体,将其转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,经异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,GST亲和层析和阴离子交换层析获得纯度较高的重组蛋白,通过凝血酶特异性识别GST标签与TyrRS之间的切割位点去除GST标签,纯化的蛋白通过SDS-PAGE和蛋白免疫印迹等方法鉴定,结果显示,人源TyrRS蛋白及其GST融合蛋白的分子量分别为59kDa和86kDa,重组蛋白的产量为每升培养体系约2.20mg.纯化所得的人源TyrRS蛋白及其GST融合蛋白可以用于后续研究,这为今后研究该蛋白的功能及其在氨基酸感知中的具体作用机制提供了良好的基础.
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