猪转基因胚胎生产的策略与问题

来源 :中国畜牧兽医学会2011学术年会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:liuzixing0210
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  借助转基因体细胞核移植(SCNT,也称克隆)及单精子胞浆内注射(ICSI)技术,可将具有抗PRRSV性能的候选基因通过重组与表达,生产出对病毒具有抵抗能力的转基因胚胎或后代,有助于培育特定的抗病猪群;但上述两种生产猪转基因胚胎的方法尚不完善,效率偏低。本文通过对前期研究结果的评价,通过构建具有PRRSV功能的shRNA质粒pEGFP-N1-shRNA,采用脂质体法将pEGFP-N1-shRNA质粒导入PK-15细胞中,G418筛选获得抗PRRSV转基因PK细胞系。转基因克隆采用转基因PK15细胞作供核细胞,注入体外成熟的去核卵母细胞卵周隙内,构建重构胚。最终获得5枚弱荧光转基因克隆桑椹胚,1枚强荧光ICSI 2细胞胚胎。指出,如何有效提高克隆效率、优化组合高技术程序并切实提高操作技能,是制约SCNT及ICSI技术发展的重要瓶颈,通过技术或理论创新突破这一制约瓶颈,业已成为一项急迫的新任务和新挑战。
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