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目的 评价蒲黄-五灵脂配伍药对不同用法的镇痛效应及其物质基础变化.方法 采用原发性痛经模型、小鼠热板模型和冰醋酸致小鼠扭体模型三种致痛模型评价蒲黄-五灵脂配伍药对的镇痛效应；采用UPLC-QTOF-MS方法分析药对不同用法提取物中效应成分群，并运用Waters makerlynxV4.1软件对其化学成分群进行PCA分析.结果 不同致痛实验模型研究结果均表明，给药组与模型组相比均有显著性差异，且醋煮水提取物组镇痛效应优于水提物组；UPLC-QTOF-MS分析检测了药对不同提取物中26个色谱峰，其中鉴定了11个化合物；Waters makerlynx V 4.1软件进行PCA分析结果显示，蒲黄-五灵脂药对不同用法的提取物总离子流色谱峰之间存在较大差异，且存在一定的变化趋势，同时鉴定出8个差异较大的化学成分，分别为异鼠李素，槲皮素，山奈酚，香蒲新苷，异鼠李素-3-O-芸香糖苷，槲皮素-3-O-(2G-α-L-鼠李糖基)-芸香糖苷，槲皮素-3-O-新橙皮糖苷；山奈酚3-O-新橙皮糖苷.结论 蒲黄-五灵脂药对经醋煮后其水提物的镇痛效果优于直接水提物，且在原发性痛经模型和醋酸致痛模型更为显著；药对不同用法其效应物质基础发生一定变化，醋煮后有利于蒲黄中黄酮类成分的溶出，为进一步阐明药对的配伍作用机制研究提供了有益参考.