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以4～5片叶的组培香蕉苗和粉蕉苗为材料,采用伤根浸菌液的接种法对分离自广东省不同香蕉种植区的10株香蕉枯萎病菌进行了致病性测定.其中7株为香蕉枯萎病菌4号生理小种,对粉蕉和香蕉都致病；3株为1号生理小种,只对粉蕉致病.不同菌株在PDA、K2培养基、粉蕉组织浸提液培养基和香蕉组织浸提液培养基中培养形态、生长速率、产孢情况不能区分生理小种,但在康乃馨叶片琼脂(carnation leaf agar,CLA)培养基上产生的孢子形态具有明显差异,4号生理小种的菌株产生较多的典型尖镰刀状大孢子,占总孢子比例较大(40.87％～62.50％),而1号生理小种个体产生的大型孢子极少(2.55％～4.50％),孢子较短小,前端钝圆,弯曲程度低,分隔少.利用真菌核糖体rDNA区通用引物ITS1和ITS4,扩增了10株菌包括18S rDNA部分序列、ITS 1-5.8S-ITS2全部序列和28S rDNA部分序列的片段,采用最大简约法,以层出镰刀菌(Fusarium proliferatum)(EU151490)和茄病镰刀菌(Fusarium solani)(GQ376116)为外群,将10株菌的序列与BLAST检索获得的其他3株尖镰孢古巴专化型(F.oxysporum f.sp.cubense)和1株文献报道的菌株相应序列构建了系统发育树.系统发育分析结果显示,10株菌与NCBI登录的4个尖镰孢古巴专化型菌株一起被分成2个亚群,聚类结果与回接鉴定和文献报道的生理小种结果完全一致.结果表明,广东省香蕉枯萎病菌存在1号和4号两个生理小种,菌株在CLA培养基上的孢子形态可以作为小种鉴定的参考依据,利用ITS1和ITS4通用引物扩增片段可对香蕉枯萎病菌生理小种进行快速和准确的鉴定.