【摘 要】
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根据猪流行性腹泻病毒CH/S株M蛋白的基因组序列，设计一对引物，采用RT-PCR方法扩增出M基因，将其克隆至原核表达载体pMXB10,构建了重组质粒pMXB-M，经测序鉴定正确后转化感受态
【机 构】
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中国农业科学院 哈尔滨兽医研究所，兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室，黑龙江哈尔滨 150001
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根据猪流行性腹泻病毒CH/S株M蛋白的基因组序列，设计一对引物，采用RT-PCR方法扩增出M基因，将其克隆至原核表达载体pMXB10,构建了重组质粒pMXB-M，经测序鉴定正确后转化感受态细胞BL21(DE3)，并进行IPTG诱导表达。结果表明重组菌pMXB-M表达的融合蛋白MBP-M-CBD(rM)的分子质量约为951ku。在IPTG的浓度为0.8mmol/L，诱导时间为5h时，重组菌的表达效果最好，重组蛋白以包涵体的形式存在于菌体中。Western-blot结果显示，rM能与兔抗PEDV多克隆血清及PEDVM蛋白单克隆抗体发生特异的免疫印迹反应，表明原核表达的rM蛋白具有良好的反应原性，为进一步开展关于PEDV M蛋白的研究奠定基础。
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