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目的：获得表达血管内皮生长因子(VEGF)的基因工程神经干细胞(NSCs),研究缺氧反应元件(HRE)在缺氧条件下是否能提高VEGF基因的表达,以期为缺氧缺血性脑损伤寻求一种安全、高效的基因治疗方法.方法：分离胎龄14d的SD大鼠胚胎大脑皮质,采用无血清培养的方法获得细胞克隆,应用间接免疫荧光法鉴定NSCs和分化的神经细胞.构建携带VEGF165基因的两种重组慢病毒载体pGC-FU-VEGF165、9HRE-pGC-FU-VEGF165,将两者分别转染NSCs细胞,转染后的NSCs分为7组:A组为转染pGC-FU-VEGF165重组慢病毒后于常氧条件下培养的神经干细胞、B1组为转染9HRE-pGC-FU-VEGF165重组慢病毒后于常氧条件下培养的神经干细胞,B2组为转染9HRE-pGC-FU-VEGF165重组慢病毒后于缺氧条件下培养6h的神经干细胞,B3组为转染9HRE-pGC-FU-VEGF165重组慢病毒后于缺氧条件下培养12h的神经干细胞,B4组为转染9HRE-pGC-FU-VEGF165重组慢病毒后于缺氧条件下培养24h的神经干细胞,C组为转染空载体慢病毒于常氧条件下培养的神经干细胞,D组为未转染慢病毒于常氧条件下培养的神经干细胞作为的空白对照组,(常氧条件为95％O2+5％CO2;缺氧条件为2％O2+98％N2);荧光显微镜和流式细胞仪检测感染效率,Western-blot检测转染后细胞分泌型血管内皮生长蛋白的表达水平,MTT法检测转染后NSCs的增殖活性.结果:①离体培养的胎鼠神经干细胞呈Nestin阳性;②经测序两组目的基因与GenBbank中序列完全一致，成功构建HRE-pGC-FU-VEGF165及pGC-FU-VEGF165两组慢病毒载体;③将慢病毒转染神经干细胞分组后在荧光显微镜下观察可见A组、B2组、B3组、B4组、C组基因工程神经干细胞发出绿色荧光，B1组、D组未见绿色荧光;流式细胞仪检测A组细胞转染率50％左右，B2组、B3组、B4组、C组细胞转染率为80％左右，B1组、D组细胞转染率为0.49％左右.结论:成功构建具有缺氧诱导特性的高表达VEGF的基因工程NSCs，证明NSCs一EGF基因工程干细胞可分泌活性VEGF蛋白，促进神经干细胞增殖，在缺氧时受HRE启动子作用，能提高VEGF基因的表达，随缺氧时间的改变HRE可对VEGF表达水平进行调控，为缺血缺氧性脑损伤实现安全、高效的基因治疗方法提供物质基础。