【摘 要】
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柑橘大实蝇自2008年在四川广元暴发成灾以来,各地相继报道发生为害,尤以湖北、湖南、重庆、贵州和四川为害最重,并威胁到其他非分布地区的柑橘生产.解析危险性有害生物的种群遗传信息、重构其传播扩散的路径是制定防除方案及阻截措施的重要基础,而微卫星标记又是近年来对种群遗传研究中的一个重要手段.因此,本研究旨在优化柑橘大实蝇微卫星多重PCR体系.首先,筛选出3个多态性较好的柑橘大实蝇微卫星位点(长度分别为
【机 构】
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西南大学昆虫研究所,重庆400716
【出 处】
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中国植物保护学会第十一次全国会员代表大会暨2013年学术年会
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柑橘大实蝇自2008年在四川广元暴发成灾以来,各地相继报道发生为害,尤以湖北、湖南、重庆、贵州和四川为害最重,并威胁到其他非分布地区的柑橘生产.解析危险性有害生物的种群遗传信息、重构其传播扩散的路径是制定防除方案及阻截措施的重要基础,而微卫星标记又是近年来对种群遗传研究中的一个重要手段.因此,本研究旨在优化柑橘大实蝇微卫星多重PCR体系.首先,筛选出3个多态性较好的柑橘大实蝇微卫星位点(长度分别为240bp、165bp和108bp左右),分别在3对引物的上游引物添加FAM,HEX和TAMRA；然后,对其多重PCR体系进行优化.最终研究发现：在1.5 mM MgCl2,10×PCR buffer 2.5μl,0.6mM dNTPs和3.5 U Taq DNA酶,上游引物分别加0.6μl、0.8μl和1.0μl(对应长度240bp、165bp和108bp,引物浓度为10μM),下游引物则都加1.0μl,DNA模板量为80ng的25μl体系中效果最佳.最佳扩增条件为95℃预变性5min；94℃变性45s,50℃(参照3条引物中最低退火温度)退火60s,72℃延伸90s,共进行35个循环；65℃后延伸30min；12℃保存.
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