论文部分内容阅读
目的建立腹泻型肠易激综合征(IBS-D)肝郁脾虚型病证结合大鼠模型,并初步筛选与其发病相关的蛋白质分子。方法采用母子分离+慢性束缚应激+番泻叶灌胃法建立大鼠模型,从宏观疾病特征(内脏高敏感、大便频次和性状)、宏观证候特征(肝郁脾虚证)和微观生物学指标(IBS-D患者感觉、动力、精神、免疫功能异常相关指标)三个方面评价模型。采用结直肠测压法评价其内脏敏感性、大便积分评价大便基本特征;采用旷场实验、糖水偏好实验、悬尾实验、体重变化量、进食量评价肝郁脾虚证;检测血清5-HT、脑源性神经营养因子(BDNF)、IgA、IgG、D-木糖、近端结肠和末端回肠嗜铬细胞(EC)、肥大细胞(MC)数量、血液和胸腺T淋巴细胞亚群分布评价其微观生物学特征。采用iTRAQ技术对模型大鼠结肠和脑组织的差异表达蛋白进行筛选和鉴定,基于Gene Ontology和Uniprot数据库对鉴定得到的差异蛋白进行功能注释。结果(1)模型大鼠具有内脏高敏感性、肠道通透性增加的疾病特征;(2)与正常大鼠相比,模型大鼠旷场穿格数、站立数减少,糖水偏好率降低,悬尾不动时间延长,体重增长缓慢等肝郁脾虚证的特征(P<0.05);(3)与正常大鼠相比,模型大鼠血清5-HT水平升高,近端结肠和末端回肠EC数目增多,近端结肠MC增多,血清D-木糖含量降低,IgA水平升高(P<0.05);血清BDNF和IgG水平无明显变化;血液Th亚群比例升高、Tc亚群比例降低(P<0.05),与IBS-D患者临床生物学指标变化基本一致;(4)与正常大鼠相比,模型大鼠结肠和脑组织中存在大量差异表达的蛋白质分子,功能涉及疼痛调节、离子转运、免疫调节、中枢调节、脑肠相互作用等多个方面。结论采用母子分离+慢性束缚应激+番泻叶灌胃可成功复制IBS-D大鼠模型,该模型结肠和脑组织中存在大量差异表达的蛋白质分子。