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目的:分离培养结直肠癌相关成纤维细胞(cancer-associated fibroblasts,CAFs),分析其与正常成纤维细胞(normal fibroblasts,NFs)的特征差异。方法:取新鲜结直肠癌及对应的正常结肠组织标本,采用组织块培养法分离培养CAFs和NFs,光镜、免疫荧光显微镜和蛋白质印迹(western blot)技术鉴定所分离的细胞,荧光定量聚合酶链反应(quantitative polymerase chain reaction,Q-PCR)、免疫荧光显微镜技术、电镜观察和流式细胞术分析成纤维细胞的活化和生长特征。结果:组织块培养法成功分离结直肠癌相关成纤维细胞和NFs,形态上NFs为长梭形,排列呈束状、编织状、漩涡状,CAFs呈胖梭形、星形或多边形形态,散在分布、排列无规则,胞质中可见较明显的肌动蛋白骨架;免疫表型上,二者均表达纤维连接蛋白(fibronectin),不表达E钙黏蛋白(E-Cadherin)、CD31和钙结合蛋白(caldesmon)。Q-PCR结果显示,CAFs之成纤维细胞活化蛋白(fibroblast activation protein,FAP)mRNA表达水平高于NFs,而成纤维细胞特异蛋白1(fibroblastspecific protein,FSP1)mRNA表达则低于NFs。Western Blot结果显示NFs和CAFsα平滑肌肌动蛋白(a-smooth muscle actin,α-SMA)表达量无明显差异,免疫荧光显微镜观察CAFs胞质中α-SMA呈束状、平行、规则地沿细胞长轴排列,NFs中α-SMA则无此特征。电镜显示CAFs胞质中可见密集、排列规则的肌丝,而NFs则无。流式细胞术检测CAFs S期和G2期细胞数明显低于NFs,Q-PCR结果显示CAFs相比NFs转化生长因子β1(transforming growth factor 1,TGFβ1)、基质源性因子(stromalderived factor 1,SDF-1)和血小板源性生长因子D(platelet derived growth factorD,PDGF-D)mRNA表达下降,PDGF-C mRNA表达升高,表明CAFs相比NFs增殖下降,细胞因子分泌存在差异。结论:CAFs与NFs在形态、活化特征及部分细胞因子分泌方面存在较大差异,CAFs相比NFs生长增殖能力下降。