【摘 要】
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目的 构建携带人血管内皮钙黏蛋白(VE-cadherin)基因的重组慢病毒载体,在Sup-B15 细胞中表达VE-cadherin 蛋白.方法 RT-PCR 扩增人VE-cadherin 基因并克隆至pCR-Blunt载
【机 构】
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徐州医学院附属医院血液科 221002
【出 处】
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第四届全国血液肿瘤学术大会暨第七届全国淋巴肿瘤诊治进展研讨会
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目的 构建携带人血管内皮钙黏蛋白(VE-cadherin)基因的重组慢病毒载体,在Sup-B15 细胞中表达VE-cadherin 蛋白.方法 RT-PCR 扩增人VE-cadherin 基因并克隆至pCR-Blunt载体.将VE-cadherin DNA 片段连入慢病毒转移质粒pLB,生成重组慢病毒质粒pLB-VEC.三质粒共转染法包装慢病毒,重组慢病毒感染Sup-B15 细胞,光学显微镜观察细胞状态,流式细胞术及Western-Blot 鉴定VE-cadherin 的蛋白表达.结果 成功扩增出人VE-cadherin DNA 片段并克隆至pCR-Blunt 载体；亚克隆构建慢病毒载体pLB-VEC.经三质粒包装系统包装后获得高滴度慢病毒颗粒,体外可有效感染Sup-B15 细胞.感染后细胞发生明显的形态改变,流式细胞术及Western-Blot检测到VE-cadherin 蛋白表达.结论 成功构建携带人VE-cadherin 基因的慢病毒载体pLB-VEC,并可在Sup-B15 细胞中获得有效的表达.
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