稳定表达HLA-B*1301/130201的16HBE及HaCaT细胞系的构建

• 作 者: 杨海军;戴宇飞;郑玉新;
• 机 构: 中国疾病预防控制中心职业卫生与中毒控制所,北京 100050
• 出 处: 中华预防医学会第三届学术年会暨中华预防医学会科学技术奖颁奖大会、世界公共卫生联盟第一届西太区公共卫生大会、全球华人公共卫
• 发表日期: 2009年期

　　目的 构建稳定表达人类白细胞抗原(human leucocyte antigen, HLA)-B*1301/130201 的16HBE及HaCaT细胞系.方法 应用SSP-PCR技术扩增HLA Ⅰ类基因B基因座位产物；通过基因重组技术将扩增产物整合入真核表达载体pcDNA3.1(+),构建重组质粒pcDNA3.1(+)-B*1301；通过基于PCR及限制性内切酶酶切特异性甲基化/半甲基化序列的定点突变技术将pcDNA(+)-B* 1301定点突变为pcDNA3.1(+)-B* 130201；应用基因克隆技术将HLA-B* 1301/130201亚克隆至逆转录病毒载体pBABE-puro,构建pBAB E-p-B*1301-F LAG/B* 130201-F LAG重组质粒；并通过假病毒感染的方法将逆转录病毒载体转导入16HBE及HaCaT细胞,以构建稳定表达目的基因的16HBE及HaCaT细胞系；采用免疫印迹技术检测融合标签蛋白FLAG的表达.