桃褐腐病菌中Mona遗传元件引起DMI杀菌剂抗性的功能研究及检测方法

来源 :第十届中国植物病害化学防治暨国际学术研讨会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:lajiub1987
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  在桃褐腐病菌(Monilinia spp.)中,DMI杀菌剂抗药性产生的机理已经被证明可由靶标基因MfCYP51的过量表达所造成.而MfCYP51的过量表达可能和其启动子区域的一个65bp的Mona片段的插入相关.本实验中,构建了Mona驱动报告基因NPT2的表达载体pMona-NPT,并转化野生型桃褐腐菌株获得pMona-NPT转化子.通过检测NPT2基因功能的启动,验证了Mona的启动子活性.为了进一步确定Mona的启动子活性区域,构建了6个依次删减Mona启动子区域的NPT2报告基因载体,转化野生型桃褐腐菌株,检测不同长度启动子活性,最终将启动子活性区域确定到其中的20bp片段.为了进一步证明Mona的插入和DMI抗药性的产生有直接关系,本研究还对DMI抗药性菌株Bmpc7进行了Mona敲除实验,同时在DMI敏感菌株HG3的MfCYP51基因上游人工插入了Mona片段.获得的敲除子在EC50数值和MfCYP51基因表达量上都低于亲本菌株.而插入子的EC50和MfCYP51的表达量都高于亲本菌株.这些结果表明Mona元件通过上调其下游的MfCYP51基因的表达量,引起了DMI抗药性的产生.Mona敲除子和插入子都未表现出适合度下降的现象,具体而言,转化子和亲本表现出相同的菌丝生长速率,产孢量,以及在果实上的侵染力,说明Mona元件不影响桃褐腐菌株基本的生命活性.
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