【摘 要】
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构建抗狂犬病病毒糖蛋白单链抗体原核表达质粒,将重组质粒转化表达宿主菌E.coli BL-21,IPTG诱导表达目的蛋白,SDS-PAGE检测目的蛋白的表达,采用连续梯度透析方法对提取的包涵体进行复性,分别以疏水作用层析、离子交换层析及凝胶过滤层析纯化目的蛋白,ELISA检测ScFv与病毒感染细胞结合活性。结果:经IPTG诱导,目的蛋白获得高效表达,最优表达条件为0.5mMIPTG 25℃诱导5h,
【机 构】
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军事医学科学院军事兽医研究所 长春 130062 吉林大学畜牧兽医学院 长春 130062 军事医
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构建抗狂犬病病毒糖蛋白单链抗体原核表达质粒,将重组质粒转化表达宿主菌E.coli BL-21,IPTG诱导表达目的蛋白,SDS-PAGE检测目的蛋白的表达,采用连续梯度透析方法对提取的包涵体进行复性,分别以疏水作用层析、离子交换层析及凝胶过滤层析纯化目的蛋白,ELISA检测ScFv与病毒感染细胞结合活性。结果:经IPTG诱导,目的蛋白获得高效表达,最优表达条件为0.5mMIPTG 25℃诱导5h,蛋白表达量占菌体总蛋白的31％。连续梯度透析复性后,可溶蛋白浓度为600μg/mL。经三步纯化后,目的蛋白纯度达94％。ELISA结果表明:ScFv与病毒感染细胞具有良好的结合活性。
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本文应用多态性较好的7对选择性引物组合对26只雌性德国牧羊犬血样DNA进行扩增,共得到可变标记23个。t检验表明:标记E39/T33-22和E39/T38-35与德国牧羊犬的躯干部形态显著相关;标记E39/T49-5与德国牧羊犬的四肢步态显著相关;标记E39/T38-16与德国牧羊犬的受胎率显著相关,表明这些标记可能是调控相关性状的主基因或主效基因,或与之连锁。
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